肺心汤含药血清对体外肺动脉平滑肌细胞增殖及PHD2、HIF1α、VEGF的影响.pdf

中 文 摘 要 【目的】 本实验拟通过肺心汤含药血清、PHD2siRNA 联合处理体外培养肺动脉平滑 肌细胞，探讨肺心汤含药血清对低氧环境中离体大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及 PHD2、HIF-1α、VEGF 的影响。 【方法】 第一步，慢病毒转染体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞；第二步，用经证实 含有肺心汤有效中药成分群的大鼠含药血清、正常空白血清培养大鼠肺动脉平滑 肌细胞；第三步，采用实时荧光定量（Real-time PCR）测定各处理组 HIF-1α、 PHD2、VEGF、cyclinD1 RNA 表达量，Western-blot 测定各处理组 HIF-1α、PHD2、 VEGF、cyclinD1 蛋白表达量，流式细胞术测定各处理组细胞周期变化。 【结果】 1. Real-time PCR、Western-blot 结果中，PHD2 三组干扰序列，LV-1 能明显 降低 PHD2mRNA、蛋白表达。 2.低氧环境中， Real-time PCR、Western-blot 结果中肺心汤含药血清处理组 与空白组比较，PHD2 无明显变化（P0.05）， HIF-1α、VEGF 表达均表达明显减 少（P0.05） 3. Real-time PCR、Western-blot 结果中肺心汤含药血清处理组与空白组比较， cyclinD1 表达明显减少，细胞周期检测中肺心汤含药血清处理组与空白组比较， 增殖指数（Proliferation index，PI）明显增加（P0.05）。 【结论】 1. 肺心汤含药血清是通过 PHD2 调控 HIF-1α 表达来参与肺动脉平滑肌细胞 增殖的调控的。 2. 肺心汤含药血清能降低肺动脉平滑肌细胞增殖，降低 HIF-1α、VEGF 表 达。 【关键词】 肺心汤含药血清；PHD2；HIF-1α；肺动脉平滑肌细胞；增殖 本研究受湖南省中医药科研计划项目重点课题(No.2009007) 资助 万方数据 The effect of Fei Xin Decoction drug serum on proliferation of rat pulmonary artery smooth muscle cells and PHD2/HIF-1α/ VEGF ABSTRACT 【OBJECTIVE】 Through Fei Xin Decoction(FXD) drug serum and PHD2siRNA combined treatment PASMCs cultured in vitro, the experiment aims to explore the effects of FXD drug serum on rat PASMCs in vitro which proliferates in low oxygen conditions, PHD2, HIF-1α and VEGF. 【METHODS】 Firstly, lentiviruses transfect rat PASMCs cultured in vitro. Secondly, rat drug serum and normal blank serum which were proved to con