酶与蛋白质工程第2章酶与酶工程资料.ppt

第二讲 酶与酶工程 ;酶的概念;;;(一) 根据酶的化学组成分类： 1、单纯酶：只含有蛋白质成分，如：脲酶、溶菌酶、 淀粉酶、脂肪酶、核糖核酸酶等 2、结合酶：含有蛋白成分(酶蛋白)和非蛋白成分(辅助 因子) ;* 两部分在催化反应中的作用;(二) 根据酶蛋白结构特点分类;由几种不同功能的酶彼此聚合形成的多酶复合物 ; 一些多酶体系在进化过程中由于基因的融合，多种不同催化功能存在于一条多肽链中，这类酶称为多功能酶 由单肽链构成的，含有若干个酶活性结构域; 活性中心：酶分子中结合底物并起催化作用的少数氨基酸 残基形成的一定空间结构。 包括底物结合部位和催化部位;酶活性中心的特点;酶活性中心的特点;必需基团： 在酶分子中有一些基团对维持酶活性中心应有的空 间构象及发挥正常的催化活性是必需的，若将这些基团改变后会导致酶的催化活性减弱甚至丧失 ;酶的专一性机制 ;E+S;邻近效应和定向效应; 邻 近 定 向 效 应;酶促反应动力学;在低底物浓度时, 反应速度与底物浓度成正比，为一级反应 底物浓度增大与速度的增加不成正比,为混合级反应 当底物浓度达到一定值，几乎所有的酶都与底物结合后，反应速度达到最大值V max，此时再增加底物浓度，反应速度不再增加，表现为零级反应 ;低;1913年，德国化学家Michaelis和Menten根据中间产物学说对酶促反应的动力学进行研究，推导出了表示整个反应中底物浓度和反应速度关系的著名公式，称为米氏方程 ;酶浓度对酶反应速度的影响 ;温度对酶反应速度的影响 ;pH对酶反应速度的影响 ;激活剂对酶反应速度的影响 ;抑制剂对酶活性的影响;常见的不可逆抑制剂;胆碱乙酰化酶;有机磷农药（敌百虫、沙林）; 抑制剂二异丙基氟磷酸酯引起酶的永久失活;竟争性抑制;非竟争性抑制;反竞争性抑制作用;酶的活性调节; 变构调节; ; 共价调节酶;共价调节酶最典型的例子是动物组织的糖原磷酸化酶 ;酶原及酶原的激活 ;胰蛋白酶原;胰蛋白酶原;尽管人类19世纪前后才建立起酶的概念，但酶的催化作用却很早就为人们的生活所利用 比如： (1)在人类游牧生活时期，就已会利用动物胃液来凝固牛乳 (2)人类在4000多年前就已掌握的酿酒和制酱技术其实也是酶作用的结果 ;; 第二次世界大战以后，随着微生物培养技术、发酵工业和设备的渐渐完善，利用微生物获得商品化酶制剂已形成规模化产业，并开辟了广阔的市场 ; 20世纪90年代，随着基因工程的广泛介入，一些原来只能由动物或植物生产的酶，经过酶基因重组，可以在微生物上表达 由于在发酵过程中很容易对微生物进行控制，因此 “基因工程＋发酵工艺＋先进的发酵设备”可以算是酶工业的第三次飞跃 ;酶工程; 1911年，Wallerstein从木瓜中获得木瓜蛋白酶，用于啤酒的澄清 1949年，用微生物液体深层培养法进行?－淀粉酶的发酵生产，揭开了近代酶工业的序幕 1960年，法国科学家Jacob和Monod提出的操纵子学说，阐明了酶生物合成的调节机制，通过酶的诱导和解除阻遏，可显著提高酶的产量; 在酶的应用过程中，人们注意到酶的一些不足之处，如：稳定性差，对强酸碱敏感，只能使用一次，分离纯化困难等 解决的方法之一是固定化;1971年第一届国际酶工程学术会议在美国召开,当时的主题即是固定化酶，进一步开展了对微生物细胞固定化的研究 1973年,千烟一郎首次利用固定化的大肠杆菌细胞生产L-天冬氨酸 1978年,日本的铃木等固定化细胞生产 α -淀粉酶研究成功，所以70年代是固定化细胞技术取得进展的时期 80年代，固定化细胞已能用于生产胞外酶，又发展了固定化原生质体技术，排除了细胞壁这一障碍;在酶的固定化技术发展的同时，酶分子修饰技术也取得了进展 60年代，用小分子化合物修饰酶分子侧链基团，使酶性质发生改变 70年代，修饰剂的选用、修饰方法上又有了新的发展 此外，对抗体酶、人工酶、模拟酶等方面，以及酶的应用技术研究，在近20年均取得了较大进展，使酶工程不断向广度和深度发展，显示出广阔而诱人的前景;化学酶工程;固定化酶;酶的改造和模拟 ;人工模拟酶?-benzyme; 在化学酶工程基础上发展起来的，以酶学和DNA 重组技术为主的现代分子生物学技术相结合的产物 包括： 1）克隆酶: