免疫性血小板减少症患者血小板计数对ADAMTS13和VWF活性影响.pdfVIP

中文摘要 免疫性血小板减少症患者血小板计数对ADAUTSl 3和VWF活性的 影响 摘 要 目的：免疫性血小板减少症(ITP)是一种常见的血液系统自身免疫 性疾病。其年发病率在欧美国家约为5／10万一10／10万【l】。ITP以外周血血小 板计数减少和骨髓巨核细胞成熟受阻为主要特点，临床表现主要为皮肤粘 膜出血，严重病例可发生内脏出血。从理论上来讲，ITP患者的血小板计 数与其临床出血程度应成负相关，即血小板计数越低，患者出血风险越高。 但在实际临床过程中却发现，大多数ITP患者即使血小板计数重度减低， 甚至低于10×109／L时也并未发生明显的出血表现。这提示在人体内可能 存在某种或某些代偿机制，在血小板计数减低的情况下通过对止凝血系统 中某些相关因子的调节作用来减低患者的出血风险。 血管性血友病因子(VWF)是血浆中一种重要的止血相关蛋白，它 主要是由血管内皮细胞和骨髓巨核细胞合成和分泌。V岍前体蛋白形成 后，运至内质网，两两在C端以二硫键结合形成二聚体，然后再转运至 高尔基体，在高尔基体内实现多聚体化，形成大分子的V珊多聚体。成 熟的VWF在初期止血和二期止血方面均发挥着重要作用。在初期止血中， 在血管损伤导致内皮下胶原暴露时，VWF可介导血小板与胶原的结合， 促进血小板粘附和聚集，从而于出血局部形成血小板血栓而达到止血的目 的。另一方面，VwT通过非共价键与VIH因子(FⅥII)结合形成复合物， 作为FVIII的载体来保护FVIII不被水解，从而延长其半衰期。研究证实， 正常人体血浆中V岍的分子量介于500—20，000kDa，而其分子量的大小 是由一种称为ADAMTSl3的金属蛋白酶来调节的。它是通过特异性地剪 切v岍一A2功能域内的Tyrl605一Metl606之间的肽键来实现的，从而保 证VW多聚体以正常的分子量形式存在，这样既可防止因分子量过大而 发生血栓形成倾向，也不至于因分子量过小而造成出血风险。本研究的目 的在于通过相关实验来证实当血小板计数重度减低时，是否可以在体内通 过降低ADAMTSl3对于VWF的水解活性来增加血浆中的Ⅵ7汀的分子 量，进而增强VW的止血活性，以减轻因血小板减低造成的出血风险。 中文摘要 方法： l研究对象分为实验组和正常对照组。(1)实验组：收集201 1年1月 -2013年6月期间就诊于河北医科大学第二医院的部分原发性ITP患者， 所有患者均符合ITP的诊断标准(符合张之南主编的《血液病诊断及疗效 判定标准》第三版)，且均不合并存在高血压、糖尿病、急慢性感染性疾 病和免疫风湿性疾病等。进一步分为治疗前组和治疗后组：①治疗前组： 为治疗前血小板计数_10x109／L且白细胞计数和血红蛋白均在正常值范围 内的ITP患者，共50例；②治疗后组：治疗前组的I口患者中经治疗后 血小板计数恢复正常(PLT_100x109／L)的患者，共30例。(2)正常对照 组：为例行查体的血常规和凝血常规正常的健康人，无高血压、冠心病、 糖尿病、免疫风湿性疾病和脑血管疾病等，且未服用任何药物，共50例， 男女各25例，年龄20．69岁，中位年龄48岁。 2标本采集：取患者和正常对照人群的外周静脉血，以枸橼酸钠抗凝， 离心后取血浆，．70。C冻存备用。 3检测项目：包括VW抗原(VWF：Ag)、VWF活性(VWF胶原结 合活性，即VWF：CB)、VWF：CB／VWF：Ag比值和ADAMTSl3体外活性。 VwF：Ag和VWF：CB均采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行测定。 而ADAMTSl3体外活性测定采用荧光共振能量转移VWF86底物法 (FRET_VWF86)。 4统计学分析：计量资料以Mann．Whitney U检验是否正态；符合正 态分布后以均数4-标准差(i4-S)来表示。多组问比较采用单因素方差 (One．Way ANOVA)分析，方差齐选用SNK-q法，方差不齐选用采用 Dunnett’S C检验。P值o．05视为具有统计学差异。 结果： 1 VWF：Ag测定：结果显示，治疗前组、治疗后组和正常对照组测得 的血浆V盯：Ag分别为(0．974-0．46)、(0．994-0．55)和(0．96+0．41)，P值 0．05，表明ITP患者经治疗血小板恢复正常前后的珊：Ag无明显变 化，且与正常人群相比均无明显差异。 2 VWF：CB测定：治疗前组、治疗后组和正常对照组的VWF：CB分别 为(2．084-0．46)、(1．09+0．35)和(1．134-0．41)。结果显示：治疗前组的 VWF：CB明显高于正常对照组(P值0．05)，也明显高于治疗后组(尸 中文摘要 值O．05)，但治疗后组的VWF：CB与正常对照组没有差异(尸值0．05)， 这表明血小板减低(PLT≤10×109／L)患者较