3.抗菌药物的体内外活性评价方法课件.pptVIP

抗菌药物活性评价方法研究进展 　　山东省千佛山医院　孙淑娟 CONTENTS 抗菌药物敏感性实验测定方法 MIC、MBC测定 杀菌曲线 联合药效测定 血清杀菌活性/滴度 抗菌药物对细菌形态影响研究进展 抗菌药物抗菌活性评价方法 体外： 药物敏感性实验 MIC/MBC测定 时间-杀菌曲线 联合药敏试验 抗生素后效应：PAE 体内 ： ED50（动物） 临床有效率与细菌清除率 抗生素后效应 血清杀菌滴度(SBA) ???? 一、药物敏感性实验测定方法MIC/MBC测定  NCCLS：National Committee for Clinical Laboratory Standards Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI) 药物敏感试验：MIC测定 纸片法:K-B法(定性法） 　　　　 定量纸条法（E-test）　　 稀释法：常量法：试管稀释法(1－2ml) 微量法：肉汤稀释法(0.1-0.2ml)： 肉眼观察、OD、MTT、XTT 琼脂稀释法 1. 纸片法（Disk Diffusion Assay) 又称K-B法（Kirby-Bauer)：利用含一定浓度抗菌药物的滤纸片贴附在涂布受试菌的琼脂平板，孵育18-24h后，据抑菌圈的大小判定细菌对抗生素的敏感性，该法简便，是临床抗菌药物敏感性检测定性的常用方法； 菌液浓度一般为104cfu/ml 。 抑菌圈直径解释标准。 报告(定性）：针对抑菌圈直径测量值报告敏感、中介、耐药。 影响因素：琼脂成分、孵化温度、细菌接种量、抗菌药物纸片含量。 2. Epsilometer Test 特点： 新 综合了定性（易操作）及定量的特点， 可从含药梯度条上能直接读出MIC值 费用高限制了其应用。　 3.稀释法 MIC测定是将细菌与系列稀释的抗菌药物共同孵育18－24h，观察能抑制细菌生长的最低浓度 ，MBC则是在此条件下，使受试菌99.9%被杀灭的最低药物浓度。MBC测定需要进行菌落计数。 实验用细菌浓度：1～5×105　CFU/ml(colony forming units) MIC测定方法及终点 MIC终点： 100%抑制，细菌 80%抑，真菌 50% 研究 肉眼观察 比浊(类OD) 比色：采用氧化-还原指示剂进行比色分析的终点判读方法 噻唑蓝 （MTT) ，甲基四氮盐（XTT)。 结果影响因素 培养基及其所含阳离子（生理水平的钙、镁离子影响氨基糖苷类的抗菌活性、pH值、血清蛋白) 菌液浓度 培养温度与时间 观察与测定方法 药敏报告的临床意义 敏感(Sensitive S)：表明该菌株所致感染，用此药物正常剂量，除非存在禁忌症。 中介(Intermedium I): 此菌所致的感染可以用此药，但需加大剂量。 耐药（Resistance R): 此菌所致的感染用此药无效。 药敏试验折点的建立 MIC的分布 药代动力学和药效学 定 MIC的折点 临床疗效和细菌清除率 抑菌圈直径的分布 定 抑菌圈折点 统计学的线性回归 计算错误率：尽可能减少极重要误差(假敏感率) MIC的局限性 体外抗菌药物敏感测定虽能反应抗菌药物的抗菌活性，但只表明抗菌药物在其一定浓度的活性，不能体现抗生素杀菌的动态过程及不同浓度抗菌药物的抗菌过程。 多用于科研 MIC测定-稀释法真菌 NCCLS M-27 A，CLSI M-27A 念珠菌 NCCLS M-27 A2，CLSI M-27A2 M38-A 霉菌 菌液浓度：0.5～2.5×103cfu/ml 二、时间-杀菌曲线法 将受试菌与一定浓度的抗生素共同孵育，在不同时间点进行菌落计数，以时间为横坐标，细菌数的对数值为纵坐标所绘制的曲线；可用不同抗生素浓度绘制多条杀菌曲线，如1/4，1/2，1，2，4倍MIC，杀菌曲线的斜率反应出药物对细菌的杀灭速度。 曲线一般分为三个时相：延迟时、杀菌期和恢复再生长期。可比较不同抗菌药物的杀菌速度和持续时间。 杀菌曲线 通过杀菌曲线可以发现，在低于MIC值时，杀菌曲线斜率为正值，随着药物浓度的增加，斜率逐渐减小；当抗生素浓度为MIC时，杀菌曲线有两种情况，一为曲线斜率呈负值，另一为曲线近水平状，表明前者有杀菌作用，为杀菌剂，而后者则只是具有抑菌作用，为抑菌剂。 抗菌药物分类---抗菌效果 抑菌剂 杀菌剂 杀菌曲线 对于杀菌剂，随着浓度逐渐增加杀菌曲线斜率的负值也逐渐加大，但当抗菌药物浓度增加到一定程度后（如4MIC），再增加其浓度又有两种可能，一