4-3 中药制剂分析其他定量方法课件.ppt

可见－紫外分光光度法 大纲要求 熟悉单波长光度法的一般要求及测定方法 了解等吸收点法的基本原理及测定方法 可见-紫外分光光度法 通过测定被测物质在可见－紫外光范围内特定波长或一定波长范围内的吸光强度或发光强度，对该物质进行定量分析的方法 含 义 1.灵敏度高，精密度好，操作简便 2.无分离功能，方法专属性差 特 点 紫外：200-400nm 可见：400-760nm 可见-紫外分光光度法 要求被测成分或其显色产物对可见－紫外光具有选择性吸收 类型：单波长光谱法和多波长光谱法（计算分光光度法） 适 用 要求： 选择被测成分的ymax为测定波长，而共存组分在此波长处基本无吸收，并控制供试液的吸收度读数在0.3-0.7之间 方法： 1.吸收系数法 2.对照品比较法 3.标准曲线法 可见-紫外分光光度法 单波长光谱法 空白溶剂做参比 1.吸收系数法：测定供试品溶液在规定波长处的吸收度，根据被测成分的吸收系数计算其含量 A=E·C·L 注意：仪器波长、空白吸收的校正 优点：无需对照品，方法简便 可见-紫外分光光度法 单波长光谱法 可见－紫外分光光度法 2.对照品比较法 在同样条件下，配制对照品溶液和供试品溶液，在规定波长处测定两者的吸收度，计算含量 单波长光谱法 可见－紫外分光光度法 3.标准曲线法（最常用） 先配制一系列不同浓度的对照品溶液，在相同条件下分别测定吸收度，绘制标准曲线（r≥0.999)，根据供试品的吸收度在标准曲线上求出其含量。 5～7个点， 中间浓度 单波长光谱法 可见－紫外分光光度法 供试品溶液中有两种或两种以上组分共存，可通过测定多种波长处的吸收度，根据吸收度的加和性，采用适当数学处理方法进行多组分的同时测定，或排除共存组分干扰后测定其中某个组分。 特点：可测定吸收光谱有重叠的混合组分，不需空白作参比 计算分光光度法 类型： 1.双波长法（等吸收点法和系数倍率法） 2.三波长法 3.导数光谱法 计算分光光度法 ａ为干扰组分的吸收光谱 ｂ为待测组分的吸收光谱 ｃ为混合组分的吸收光谱 关键步骤： 选择λ1和λ2的基本条件 干扰组分在λ1和λ2处应具有相同的吸收度 待测组分在这两个波长处的吸收光度差值应足够大 波长(λ1、λ2) 双波长法等吸收点法 计算分光光度法 分析步骤 ① 选择双波长（λ1、λ2） ② 绘制标准曲线 △Ａ对浓度Ｃ作图（回归） 样品测定 λ1、λ2，分别测定Ａ1及Ａ2 △Ａ 应用条件： 吸收曲线有峰和谷 双波长法等吸收点法 计算分光光度法 图1－4可用双波长消除杂质干扰，直接测定 但图5－10，无杂质的等吸收点 能否采用等吸收双波长法？ 能否采用双波长法？ 实线： 被测组分 虚线： 干扰组分 测定步骤 1.UV光谱测定：测定供试品溶液、对照品溶液、干扰组分（阴性样品）溶液的UV光谱。 2.波长选择：根据上述测得的三个光谱特征，选择适宜的测定波长； 3.标准曲线绘制：用对照品配制5-7种不同浓度的溶液，分别测定其响应值，得回归直线方程（r≥0.999）。 4.样品测定:配制被测组分浓度处于标准曲线线性范围内的样品溶液，测定各所选波长处的吸收度 计算分光光度法 应用 大类成分的测定：总黄酮、总生物碱、总蒽醌，多糖 硝酸钾－三氯化铝与黄酮显色后其最大吸收波长为420nm， 亚硝酸钠－硝酸铝显色液最大吸收波长为500nm，二者皆可用于总黄酮的含量测定 硝酸钾－三氯化铝与黄酮显色UV法空白溶液的配制 由于供试品溶液有颜色,在比色测定波长处有吸收干扰。因此以不加显色剂的溶液为空白进行测定,结果更为合理准确。 如果总黄酮中，有已知成分并且有该成分的对照品，既可以该成分为对照品，采用比色法测定总黄酮的含量。如果总黄酮中没有已知成分，或者虽有已知成分，但是，却没有他们的对照品，只能用芦丁为对照品，采用比色法测定总黄酮的含量。 薄层扫描法 Thin layer chromatogram scanning TLCS TLC大纲要求 了解薄层扫描法的基本原理 了解薄层扫描法的定量分析方法 薄层扫描法 样品经薄层色谱分离后，用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱吸收紫外光或可见光的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据进行含量测定。 含义 实验成本低，流动相的选择与更换方便 （与HPLC法相比） 特点 TLCS基本原理 薄层吸收扫描法 适用：在可见光、紫外区有吸收，及通过衍生、显色等处理而具有上述性质的成分。 光源：钨灯（370-700nm)、氘灯(200-370nm) 定量分析的依据：Kubelka-Munk曲线。由于薄层板存在明显的散射现象，在测定时，需要根