第四章营养和培养基2要点.pptVIP

第四节 培养基 Foods of Microorganisms 培养基的概念 人工配制的、适合于不同微生物生长繁殖或产生代谢产物的混合营养基质。 培养基的条件 合适的营养素种类 合适的营养素比例 培养基中应含满足微生物生长发育的：水分、碳源、氮源、生长因子以及基本的离子，磷、硫、钠、钙、镁、钾和铁及各种微量元素。 此外，培养基还应具有适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力及一定的氧化还原电位和合适的渗透压。 一、选用和设计培养基的原则和方法 （一）选用和设计培养基的原则 1、目的明确 2、营养协调 3、理化条件适宜 4、经济节约 1、目的明确 培养对象及产物 研究类型 实验室研究、生产、一般研究、生理生化研究、遗传学研究 种子培养基、发酵培养基 产物含氮量 根据微生物营养特点选择培养基营养类型及种类不同的微生物需要不同的培养基。 自养型微生物的培养基不能含有机物，异养型微生物则要以有机碳化物为碳源和能源。 细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的营养要求既有共性也有特性，应选用不同的培养基。如异养型细菌常用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，放线菌、酵母菌和霉菌用高氏培养基、麦芽汁培养基和察氏培养基或豆芽汁等培养基。 2、营养协调 微生物细胞组成元素调查分析，是培养基设计的重要参考依据。 培养基中营养物质浓度合适时，微生物才能生长良好。浓度过低，不能满足需要；浓度过高，对其生长有抑制作用，如高渗溶液的抑菌作用。 营养物质之间的浓度配比，直接影响微生物的生长繁殖或代谢产物的积累。不同营养物质之间的比例：大体十倍递减。 营养协调原则中需要注意的几点 其中碳氮比（C/N）的影响较大。 碳氮比（C/N Ratio） 指在微生物培养基中所含的碳源中碳原子摩尔数与氮源中氮原子摩尔数之比 指培养基中碳源物质与氮源物质的质量比值，也指培养基中还原糖的含量与粗蛋白含量的比值 碳氮比的重要性 碳源不足，菌体易早衰；氮源过量，菌体生长过旺，代谢产物积累少；氮源不足，菌体生长过慢。 真菌：高C/N比 细菌：低C/N比 我们可以通过控制培养基碳氮比，来调控菌体生长或代谢产物的积累。 培养基中各矿质元素间的比例要适当，防止单盐毒害作用。某种氨基酸过多，发生氨基酸不平衡，将会影响对其它氨基酸的吸收。微量元素除特别需要外，一般不另外供给。因为培养基中所加牛肉膏、蛋白胨、糖及其它无机盐中均含有一定量的微量元素。用自来水配制培养基时，微量元素更不成问题。 3、理化条件适宜 培养基的理化条件 pH 水分活度（Aw）和渗透压 氧化还原电位（Eh） (1) pH 各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的最适pH条件各不相同，各大类微生物都有合适的生长pH范围 细菌：7.0～8.0 放线菌：7.5～8.5 酵母菌：3.8～6.0 霉菌：4.0～5.8 藻类：6.0～7.0 原生动物：6.0～8.0 在微生物生长繁殖和代谢过程中，常因营养物质的消耗和代谢产物的积累，引起pH变化，导致微生物生长缓慢、代谢产物产量下降。 为避免此现象，通常加入调节物质，进行内源调节或外源调节。 pH的内源调节 磷酸盐缓冲液（KH2PO4、K2HPO4） 不溶性碳酸盐CaCO3或碳酸氢钠 pH的外源调节指在培养过程中不断或间断向液体培养基中流加酸液或碱液的调节方法。 (2) 水分活度（Aw）和渗透压 微生物在等渗环境中良好生长高渗环境生长受抑：质壁分离低渗环境脆弱菌体易破裂死亡：吸水膨胀 微生物有一定的适应渗透压变化的能力细胞内渗透压的调节机制 渗透压大小由溶液中所含的的分子或离子的质点数决定 几个数据G+细菌：20 atmG-细菌：5～10 atm 水分活度 水分活度Aw相同温度和压力下，体系中溶液的水蒸汽压与纯水的蒸汽压之比。亦等于该溶液的百分相对湿度。表示微生物可实际利用的游离水的含量 Aw = p/p0 = ERH/100 （0Aw1） 微生物生长的最低Aw 普通细菌：0.91 （嗜盐细菌0.75, 葡萄球菌0.85） 普通酵母：0.88 （耐高渗酵母：0.60） 普通霉菌：0.80 （干性霉菌：0.65） 常见食品的水分活度 物品名称 Aw 纯 水 1.000 人 血 0.995 新鲜水果 0.97～0.98 海 水 0.98 家畜鲜肉 0.97 面 包 0.95 糖酱、火腿 0.90 物品名称 Aw 香 肠 0.85 果 酱 0.80 饱和蔗糖液 0.76 咸 鱼 0.75 糖果、干果 0.70 谷物、面粉 0.65 奶 粉 0.20 度量某氧化还原系统中的还原剂释放电子或氧化剂接受电子趋势的一种指标 影响Eh的因素 与氧分压有关 受pH影响。pH↓或[O2]↑，Eh↑ 通入02、H2、空气，加抗坏血酸、巯基乙酸、葡萄糖等可改变环境的Eh