Exp09-10植物总RNA的提取与鉴定(改)精编.pptVIP

实验九 植物总RNA的提取与电泳鉴定 一、实验目的 掌握提取植物总RNA的技术 学习在普通凝胶上进行RNA电泳的方法 异硫氰酸胍,SDS ?胍+?-巯基alc→RNase ?胍+SDS→蛋白变性 ?DEPC→HIS ?特定pH下溶解性不同 二、实验原理 小麦白化苗 Biofuge Primo R,电泳设备,高压灭菌锅,研钵,剪刀,移液器及枪头,EP管,一次性手套等 三、材料、器具与试剂 药品及试剂 RNAiso Plus,氯仿、异丙醇、75%alc、琼脂糖 0.1%DEPC水: 0.1ml原液+100ml H2O,振摇过夜,湿热灭菌 试剂配制 TAE电泳缓冲液: 以DEPC水制备 20 mL琼脂糖凝胶(1%) RNA上样缓冲液: 50%甘油,1mmol/L?EDTA (pH8), 0.25%溴酚兰,0.25%二甲苯青FF 四、实验步骤 ①200mg幼芽,液氮研磨,移入EP管 ②600?l RNAiso Plus液,震荡数秒, RT放置3? ③12000g 4℃离心5?,转移上清至新EP管 ④加120?l氯仿,剧烈震荡,RT放置3? ⑤12000g 4℃离心10?,转移上清至新EP管 1. 总RNA的提取 操作步骤 ⑥0.5ml异丙醇,RT放置8? ⑦12000g离心4℃, 8?,弃上清 ⑧0.5ml 75%alc洗涤 ⑨7500g离心3?,沉淀干燥5? ⑩加