第4章植物快繁与脱毒培养概念.pptVIP

第四章 植物离体无性繁殖与脱毒技术 第一节 植物离体无性繁殖技术 第二节 植物脱病毒技术 目前，植物脱毒离体快繁技术仍是植物细胞工程技术应用的主流之一； 是生物技术应用于生产并取得显著效益的一个领域，已广泛应用于花卉、蔬菜、果树、药材和林木的种苗生产。 一、离体无繁殖的概念和意义 离体无性繁殖：在离体培养条件下，将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等各种器官、组织和细胞进行无菌培养，经过不断地切割繁殖，使其再生形成完整植株，在短期内获得大量遗传性均一的个体的方法。 又称快速无性繁殖或微繁殖、微体繁殖。 试管苗：由离体无性繁殖获得的植株称试管苗。 植物脱毒：利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中侵染的病毒，生产健康的繁殖材料。 植物离体无性繁殖的意义 二、离体无性繁殖的类型 1、腋生枝型（axillary branching） 是指利用外植体上已有的顶芽和腋芽诱导其发育成枝并培养成苗的繁殖方式。 这种由芽到芽或苗的繁殖方法也被称做为“无菌短技扦插”或“微型扦插”，其繁殖速度依植物种类不同而变化范围较大，一般每个培养周期1～2月可增殖3～10倍。 高等植物的每一个叶腋通常都存在着腋芽，其中每一个都能发育成为与主轴相同的枝或苗，但在自然生长情况下由于顶端优势(terminal dominance)的存在大多数腋芽受到抑制，处于休眠状态。 3、体细胞胚（somatic embryo）型 4、原球茎(protocorm)型 （一）供体材料的准备：Stage0 （二）无菌培养物的建立（stage1） 外植体(explant)的选择依据： 供体植株的基因型：遗传性状是否优良？培养难易？实用价值？ 外植体类型：取材难易？再生难易？遗传变异？ 增殖类型：诱导的难易？繁殖速度？遗传稳定性？ 外植体培养一段时间后可形成一个或多个芽，或带根的植株、胚状体、愈伤组织、原球茎等，如果将这些材料进行切割并继续培养，可以进行连续的生长繁殖的话，那么可认为已经建立了无菌培养物，可以进入离体繁殖的下一个阶段。 （三）增殖培养（stage2） 一种植物增殖的快慢，通常通过增殖（或繁殖）速度或增殖倍数（或系数）来表示。 增殖速度（multiplication rate）：即经一次增殖培养或在一定时间段内由一个繁殖体所增殖获得的总繁殖体数或苗数。 （四）试管苗生根 （stage3） 目 的：诱导第二阶段形成的无根芽苗分化出根，最终形成具有根、茎、芽（生长点）的完整小植株，以便移栽。 1、壮苗培养 目的：使芽苗伸长而健壮 ，有利于生根。壮苗阶段不需要芽苗量的增殖，而是为了获得足够数量的大苗用于生根诱导，有时也将这一处理称为芽苗的伸长阶段（elongation）。 方法：降低或去除细胞分裂素，增加碳源。植物类型不同，壮苗培养时可以以单个的枝或丛状的芽苗进行。 2、 试管苗生根诱导 方法：分离单个的大苗、小芽丛、枝，转入生根培养基进行培养。 （2）试管外生根 方法： （1）试管内诱导根原基后在移栽 （2）生长素处理茎基部后扦插在移栽基质或营养基质中 （3）直接扦插 2、移栽（transplantation）的一般方法 （六） 再生植株的鉴定 1、鉴定的意义 由于培养时，取材部位不同、器官发生途径不同。供体材料的遗传稳定性不同。培养基中各种物质，特别是植物激素，对植物细胞构成化学诱变环境。 那些在遗传上可塑性强的种和那些易于通过不定芽再生的植物种的再生植株群体，可能会发生变异，故需要认真进行鉴定。 2、鉴定方法 ①细胞学及分子生物学鉴定：对再生株群体抽样检查根尖染色体数目、减数分裂期的染色体行为及分子水平变异等进行鉴定。 ②形态鉴定：在田间对再生株的植物学性状进行鉴定，发现变异株再作细胞学鉴定。 3、鉴定的内容：P67 ①商品性状： ②健康状况： ③遗传稳定性： ④农艺性状： 四、影响植物离体快速繁殖的因素（P67-68） 1.外植体 基因型 供试植株和外植体本身的生理状态 外植体的类型、大小、部位等 2.培养基 激素的使用多数仍符合“Skoog-Miller模式” 最好是多个培养程序可以使用同一培养基 3.培养条件 温度、光照、湿度、气体状况 五、离体无性繁殖过程中的技术问题 （一）污染（contamination ） （二）外植体的褐变 (browning) （三）玻璃化(vitrification) 第二节 植物脱病毒技术 一、病毒在植物体内的分布、传播和危害 病毒在植株体内的扩散： ①短距离移动：通过胞间连丝在植物细胞间移动，其扩散的速度很慢。如烟草普通花叶病毒运转速度为6-13um/小时； ②长距离移动：通过维管束输导组织系统移动，其扩散速