生物化学与分子生物学-2014-16replication-EnminLi-20141215要点.ppt

1959 年获诺贝尔生理学与医学奖 图16-17 反转录病毒RNA基因组转变为双链cDNA的途径-2 E H F G 3? 二 反转录病毒基因组通过cDNA中间体进行复制 cDNA 3? 3? + 3? 3? 5? 5? 5? 5? 3? 3? 5? 5? 5? 5? 初级转录产物 病毒颗粒 进细胞, 脱衣壳 cDNA第一链合成 cDNA第二链合成 整合酶 整合酶 整合 转录 加工 gag-pol mRNA env mRNA 反转录酶 蛋白酶 整合酶 Env蛋白 衣壳蛋白 + (一) (二) (三) (四) 出细胞 病毒装衣壳 病毒组装 细胞基因组 表达 组装 前病毒DNA合成 前病毒DNA 第四节 DNA损伤与修复 DNA Damage and Repair DNA损伤的概念 多种体内外因素所引起的机体细胞DNA分子的组成与结构上的变化。 体内 因素 体外 因素 DNA复制错误 化学因素 生物因素 物理因素 DNA自身的不稳定性 机体代谢过程中产生的活性氧 引起DNA损伤的因素 C C CH3 C O O O O C C C C N N H C CH3 N H N H R R 胸腺嘧啶二聚体 CH3 N R NO 活性甲基基团 甲基亚硝胺 苯并芘的诱变衍生物 O CH H C HC C H HO OH 紫外线 HNO2 NH2OH (CH3? ) 嘧啶二聚体 形成 碱基交换 C ? U A ? I 碱基 自发丢失 碱基 化学修饰 脱氨基 O 环氧化物 自由基 电离辐射 烷基化合物 重组缺陷导致的DNA片段的缺 陷或插入 H ?、? ?、X 物理因素和化学因素引发的DNA的损伤 碱基损伤与糖基破坏 DNA链共价交联 碱基修饰，碱基环破裂 DNA链，链间交联 DNA链与蛋白分子交联 DNA链，链内交联 糖基自由基反应 DNA损伤的类型 DNA链断裂 DNA链单链断裂 DNA链双链断裂 碱基错配 非AT与非CG间的碱基配对 DNA损伤修复系统 RecA蛋白、Ku蛋白、DNA-PKcs、XRCC4 双链断裂 5. 重组修复 RecA蛋白、LexA蛋白、其他类型的DNA聚合酶 大范围的损伤或复制中来不及修复的损伤 6. 损伤跨越修复 大肠杆菌中的MutH、MutL、MutS，人的MLH1、MSH2、MSH3、MSH6等 复制或重组中的碱基配对错误 4. 错配修复 大肠杆菌中UvrA、UvrB、UvrC和UvrD，人XP系列蛋白XPA、XPB、XPC……XPG等 嘧啶二聚体、DNA螺旋结构的改变 3. 核苷酸切除 修复 DNA糖基化酶、无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶 受损的碱基 2. 碱基切除修复 光复活酶 嘧啶二聚体 1. 光复活修复 (直接修复) 参与修复的酶或蛋白 修复对象 修复系统类型 (一) 直接修复 嘧啶二聚体的光直接修复 烷基化碱基的直接修复 1 2 400nm光子 ? 次甲四氢叶酸 ? FADH2 ? T-T?T+T 1. 嘧啶二聚体的光直接修复 光复活酶 光复活酶 作用机制 光复活酶: 酶蛋白（54 000）/ 次甲四氢叶酸 / FADH2 2. 甲基化修饰碱基的直接修复 突变 DNA复制 DNA复制 6-甲基鸟嘌呤 SH 甲基转移酶 甲基化 G C 碱基插入酶 (二) 碱基切除修复 (三) 核苷酸切除修复 长学制《生物化学与分子生物学》，第2版，图16-20, 339页 六种蛋白的作用：UvrA蛋白识别DNA双螺旋结构变形位点；UvrB蛋白负责解链，同时募集核酸内切酶UvrC；UvrC在损伤部位的两侧切断DNA链；UvrD蛋白去除这两个切点之间的DNA片段；DNA聚合酶Ⅰ负责填补缺口；连接酶负责封合切口。 RecAs，RecB/C/D 受损的染色体 正常的同源染色体 染色体 双链断裂 (四) 重组修复 （大肠杆菌） 跨越损伤修复 PolⅣ/Ⅴ (五) DNA损伤修复有重要生物学意义 DNA损伤修复保证了物种遗传的稳定性，对防止DNA损伤修复缺陷相关疾病的发生有重要意义。 研究DNA损伤修复缺陷，有助于揭示某些相关疾病发病的分子机制。 利用DNA损伤修复系统变异，可研发生物新品种。 祝同学们，好好学习 天天向上，早日成才 练 习 题 一 1、DNA复制时，下列哪一种酶是不需要的？ A DNA指导下的DNA聚合酶 B DNA连接酶 C 拓扑异构酶 D 解链酶 E 限制性内切酶 2、合成DNA的原料是 A dNMA B dNDP C dNTP D NTP E NMP 3、真核细胞进行DNA复制的部位是