生科第十三章DNA的生物合成要点.ppt

复制子(replicon)：基因组中能独立进行复制的单位。 复制起点： DNA复制要从DNA分子的特定部位开始，此部位称复制起点(origin)。在复制起点形成“复制叉”。 原核：仅含一个 。 真核：多个起点，形成多个“泡”或“眼”。 复制方向： ?一个起点一个叉，同方向合成两条链。 ?一个起点2个叉，不同方向合成两条链。 DNA的双向和单向复制 DNA聚合酶催化的链延长反应 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ全酶的结构和功能 大肠杆菌三种DNA聚合酶比较 连接酶连接切口 DNA聚合酶的校对功能 原核细胞DNA的半不连续复制复制过程 原核生物DNA聚合反应有关的酶类 反转录作用的意义： 1、补充了中心法则。 2、加深了对病毒致癌的认识。病毒致癌理论 3、利用反转录酶，进行基因操作，制备cDNA。 2. 切除修复（excision repair） 内切酶在二聚体处切断单链DNA； 5 ′-核酸外切酶切除含嘧啶二聚体的寡核苷酸片段； DNA聚合酶在断口处进行局部修复合成； 连接酶将新合成的DNA链与原DNA链连接在一起。 真核生物DNA聚合酶 α、β、γ及δ四种，都有5`→ 3`聚合功能。α及δ参与核DNA复制； α：链合成的引发，δ：链的延长 polδ；切除引物后填补空隙 β：外切核酸酶 γ：线粒体DNA复制 真核生物的DNA聚合酶 3. 转录过程的选择性抑制剂 2. 真核生物的转录作用 遗传物质的改变而引起的遗传信息改变，均可称为突变。 在复制过程中发生的DNA突变称为DNA损伤(DNA damage)。 突变实质：DNA分子上碱基的改变。 生物自身具有精确、严密的DNA损伤修复系统，对于保护遗传物质DNA不受破坏有重要意义。 光修复、切除修复、重组修复、SOS修复。 1、直接修复 光复活酶(photolyase) UV 3. 应急反应修复和重组修复 六、DNA重组与克隆 基因重组——在体外将目标基因的DNA片段与载体连接形成重组体。 DNA克隆——由单一DNA片段复制成许多相同DNA片段的过程。 ①从细胞中分离出DNA ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ②限制酶截取DNA片断 ③分离大肠杆菌中的质粒 ④ DNA重组 ⑤用重组质粒转化大肠杆菌 ⑥培养大肠杆菌克隆大量基因 ⑦重组体的筛选 DNA“克隆”过程 本章重点 半保留复制、半不连续复制、反转录、冈崎片段、多顺反子、单顺反子、前导链、后随链 参与DNA复制的有关酶类和蛋白质及DNA的复制过程 PCR（polymerase chain reaction）是一种体外核酸扩增技术，类似于天然DNA复制。 靶DNA分子变性解链； 在4种dNTP存在和合适和条件下，由DNA聚合酶酶促反应，由5’ －3’ 扩增延伸，形成两条新的双链DNA分子，并作为下一循环的模板； 经过30～50个循环，可使原DNA量扩增数百万倍。 9. 聚合酶链式反应（PCR）技术与DNA扩增 （七） 细菌的限制—修饰系统 限制性核酸内切酶——能识别DNA特定核苷酸序列的核酸内切酶。 如果识别序列中的碱基被修饰，限制酶将无法起作用。 限制性核酸内切酶识别的序列具有二次旋转对称性。 限制性核酸内切酶酶切产生平头末端或粘性末端。 5′—G—A—A—T—T—C—3′ 3′—C—T—T—A—A—G—5′ 5′—G T—T—A—A—C—3′ 3′—C—A—A—T—T G—5′ 粘性末端 EcoRⅠ 5′—G—T—T—A—A—C—3′ 3′—C—A—A—T—T—G—5′ 5′—G—T—T A—A—C—3′ 3′—C—A—A T—T—G—5′ 平头末端 Hpa Ⅰ . 核心酶 (core enzyme) 全酶 (holoenzyme) ?? ? ? ? ? ?? ? ? ? RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合 DNA 聚合酶 ? 分子量 亚基数 细胞内分布 酶活力百分比 外切酶活力 DNA 聚合酶 ? 110-23，000 多个 细胞核 ～80% 无 120，000 一个 细胞核和线粒体 2 ～15% 无- 400，000 一个 细胞核+ 10 ～25% 5?-3 ?外切酶 DNA 聚合酶 ? DNA 聚合酶 ? 45，000 一个 细胞核 10 ～15% 无 * 第十三章 DNA的生物合成 DNA Replication DNA RNA 蛋白质 复制 复制 转录 反转录 翻译 遗传信息传递的中心法则 生物的遗传信息从 DNA传递给 mRNA的过程称为转录。根据 mRNA链上的遗传