Mic06微生物感染的实验室诊断.pptVIP

实验室诊断的意义 明确患者的临床诊断 选择有效的治疗措施 预防疾病继续传播与流行 判断患者预后 细菌感染的实验室诊断 样本的采集、运输、样本前期处理 形态学、免疫学、生物化学、分子生物学和生物学等方法检查出病原微生物及其型别 动物实验、细菌毒素检测和药物敏感性实验 标本采集和运送 采集操作：无菌操作 ，做好标记 采集部位：组织、血、尿液、粪便、痰、脑脊液、分泌物、呕吐物、胸腹穿刺物及解剖样品等 采集时机：根据病程发展的不同阶段采集不同部位的样品 运输：应遵循安全、快捷的原则 前期处理：浓缩 形态学检查 细菌的培养特征观察： 颜色、气味、溶血性、菌落形态、细菌动力及在液体、半固体、固体培养基中的生长状态 显微镜检查法：形态、基本结构、染色性、排列方式、数量 非染色检查法 染色检查法 负染色检查法 细菌分离培养法 细菌感染的实验室诊断程序 免疫学检查 免疫沉淀反应 凝集反应 补体结合试验 免疫标记技术 生物化学检查 糖代谢试验 糖发酵试验 甲基红试验 V-P试验 蛋白质代谢试验 硫化氢产生试验 尿素分解试验 碳源和氮源利用试验 枸橼酸盐利用试验 呼吸酶类试验 过氧化氢酶试验 氧化酶试验 分子生物学检查 G+C测定技术 核酸杂交技术 聚合酶链反应技术 质粒指纹图谱技术 蛋白质芯片技术 DNA芯片技术 生物学检查 噬菌体裂解试验 细菌素分型技术 抗菌谱试验 动物实验及细菌毒素检测 药物敏感性试验 纸片扩散法 液体稀释法 E测定法(E test) 自动化药敏测定法 耐药基因测定法 病毒感染的实验室诊断 标本的采集和送检 标本采集部位： 鼻咽分泌液或痰液 、脑脊液 、粪便 、血液 标本采集时间 发病早期或急性期 标本运送 对热不稳定，装有冰块或干冰的容器内立即送检 加入青霉素、链霉素等抗生素 ，抑制细菌和真菌生长 形态学检查 光学显微镜检查 包涵体（inclusion）：某些病毒感染宿主细胞后,可在细胞核或浆内出现一个或数个、呈圆形或不规则、大小不一、嗜酸性或嗜碱性的结构 电镜检查 直接电镜法 免疫电镜法 病毒分离和培养 动物接种 小白鼠、大白鼠、豚鼠、兔、鸡、猴，采用鼻腔、脑内、皮下、皮内、腹腔、静脉等方式 鸡胚培养 组织培养 器官培养 组织培养 细胞培养 原代细胞培养： 2~3代 用于诊断和疫苗制备 二倍体细胞培养：40 ± 10代 传代细胞培养：无限传代 用于分离多种病毒，但不能用于制备疫苗 病毒生长繁殖的指标与鉴定 细胞病变效应(cytopathic effect, CPE) 红细胞吸附 红细胞凝集 干扰作用 细胞代谢反应 空斑形成单位（PFU） 细胞病变效应(cytopathic effect, CPE) 培养的单层细胞接种病毒后导致细胞发生圆缩、溶解、脱落等病变的现象。 病毒蛋白的检测 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 免疫荧光技术 酶免疫技术 固相放射免疫技术 蛋白印记分析 病毒核酸的检测 核酸分子杂交技术 核酸分子扩增技术 基因芯片技术 血清学诊断 补体结合试验 中和试验 血凝抑制试验 胶乳凝集试验 间接血凝试验 酶联免疫吸附试验 Summary CPE PFU 熟悉微生物检测的常用方法 掌握病原菌分离鉴定步骤，并能根据待检标本设计检测程序 掌握病毒分离培养的鸡胚培养方法 * * 北京大学医学部 Peking University Health Science Center 微生物感染的实验室诊断 Laboratory diagnosis of microorganism infection Medical Microbiology Excellent Curriculum 精品课程 医学微生物学 北京大学医学部病原生物学系 邹清华 P157 实验室诊断方法分类 镜下直接观察 病原微生物分离、培养和鉴定 病原微生物的抗原检测 特异性RNA或DNA片段检测 抗体和细胞免疫指征的检测 临床标本 细菌分离：分区划线 细菌培养 挑取单菌落，纯培养 鉴定 小鼠 豚鼠 家兔 * LD50 * ID50 轮状病毒负染的电镜照片 绒毛尿囊膜接种 （痘病毒 单纯疱疹病毒） 卵黄囊接种 （虫媒病毒） 羊膜腔接种（流感病毒初次分离） 尿囊腔接种 （流感病毒、腮腺炎病毒） 气室 病变细胞 正常细胞 red blood cell 红细胞吸附 virus + susceptible cells + viral proteins expressed on the cell membrane red blood cell 红细胞凝集 vi