论文-中期考核木质部内腐烂病菌生长扩展动态的研究.docx

木质部内腐烂病菌生长扩展动态的研究1试验材料与方法1.1孢子的制备苹果树腐烂病菌(Valsamali)LXS080901菌株，于陕西省富士苹果枝条上采集病组织，为青岛农业大学植物病害流行实验室单胞子器分离保存于4℃冰箱中。用农杆菌介导转化法(ATMT)将携带潮霉素B磷酸转移酶基因(hph)和绿色荧光蛋白表达基因(gfp)转入腐烂病菌，获得转化子LXS080901-16。经离体和活体的接种试验，转化子LXS080901-16和LXS080901在苹果枝干上都能导致典型的腐烂病症状，二者的致病性无差异，与田间自然发病症状没有差异。苹果树腐烂病菌PDA培养基上活化后，用0.5cm打孔器打取边缘新鲜菌丝，取20块置于大麦粒培养基中25℃黑暗培养15天左右即可产生大量分生孢子器。将产孢的大麦粒放于1%琼脂保湿，2天后分生孢子器即可溢出黄色分生孢子角。1.2腐烂病菌在木质部内的扩展动态3月下旬在青岛农业大学胶州示范园选取3年生富士苹果的1~2枝条，距基部20cm处剪除枝条形成剪口，修剪当天接种。用灭菌牙签挑取新鲜孢子角涂于木质部中央而不接触韧皮部，用湿脱脂棉包裹，塑料膜包扎保湿，7天后揭除包扎膜。并标记。接种后每个月剪取6个接种枝条，并截切成0.5cm茎段，用PDA分离每个茎段内的腐烂病菌，并在荧光显微镜下观察是否为接种病菌，以此推断腐烂病菌在苹果枝条木质部内的扩展速度。1.3不同龄期剪口木质部接种腐烂病菌后的发病动态3月下旬在青岛农业大学胶州示范园选取3年生富士苹果1-2年生枝条，距基部20cm处剪除枝条形成剪口。7天后，用灭菌牙签挑取新鲜分生孢子角涂于木质部中央，湿脱脂棉包裹，塑料膜包扎保湿，7天后解除包扎膜，并标记。以后每个月接种一次，每次20个枝条剪口。接种后每个月观察记录接种剪口的发病情况，当剪口下方枝段出现长径超过1cm的典型腐烂病斑时，记为发病。2结果与分析2.1腐烂病菌在木质部内的扩展动态接种后，结果表明，5、6、7、8、9、10、11和次年6月份月份腐烂病菌在木质部内的生长扩展到达的最远距离平均值分别为1.2，2.5，3.6，3.7，3.8，4.0、4.3和12.3cm。病菌接种后的前3个月，腐烂病菌在木质部内生长扩展速度较快，平均每月扩展1.2cm；8、9、10月份病菌的扩展处停滞状态；11月份到次年6月份木质部内的菌丝快速扩展。木质部的接种结果证实，苹果腐烂病菌能够从苹果枝条的新鲜剪锯口侵入，而且能在木质部内扩展。2.2不同龄期剪口木质部接种腐烂病菌后的发病动态二、伤口龄期对腐烂病菌生长扩展的影响图表1伤口龄期对腐烂病菌生长扩展的影响春季夏季三、不同龄期枝条对腐烂病菌生长扩展的影响