一株产菊粉酶中度嗜盐菌的16SrDNA的克隆及序列详解.doc

青 岛 农 业 大 学 本 科 生 课 程 论 文 论 文 题 目 一株产菊粉酶中度嗜盐菌的16SrDNA的克隆及序列分析 专 业 班 级 生物技术 3 班 姓 名 学 号 指 导 教 师 完 成 时 间 2014 年月16SrDNA的克隆及序列分析 论文内容（需明确列出研究的问题）： 菊粉酶可以将菊粉转化为果糖和低聚糖，还可直接发酵菊粉制备各种产品。本论文从中国胶州湾（36°724.44N，120°1444.3E）盐场多点采样，以菊粉作为MHI培养基中唯一碳源筛选出能利用菊粉生长的菌株MH-2菌株。通过使用原核细胞16S rDNA通用引物，以MH-2菌株总DNA为模板扩增得到1.5kB的DNA片段，将该片段连接到pMD-19T载体，测序获得该基因片段的序列，序列分析结果确定该菌株属Marinobacter属成员，该基因的GenBank登陆号为：JQ068107 资料、数据、技术水平等方面的要求： 此篇课程论文是在查阅了大量与菊粉酶的相关文献，分析多个类似实验结果和相关文献的基础上科学合理的进行总结与分析。在查阅相关文献过程中较为系统地学习了在导师的指导下阅读了一定数量的相关文献，。 发出任务书日期 2014年1月10日 完成论文日期 2014年10月10日 教研室意见（签字） 院长意见（签字） 一株产菊粉酶中度嗜盐菌的16SrDNA的克隆及序列分析 生物技术专业 指 导 教 师 摘要：本论文从中国胶州湾（36°724.44N，120°1444.3E）盐场多点采样，以菊粉作为MHI培养基中唯一碳源筛选出能利用菊粉生长的菌株MH-2菌株。通过使用原核细胞16S rDNA通用引物，以MH-2菌株总DNA为模板扩增得到1.5kB的DNA片段，将该片段连接到pMD-19T载体，测序获得该基因片段的序列，序列分析结果确定该菌株属Marinobacter属成员，该基因的GenBank登陆号为：JQ068107 前言 菊粉酶易称菊糖酶。因其最早是从菊科植物中分离出来的，故而称为菊粉酶。菊粉（inulin）是最简单的一类果聚糖，简写为GFn。是一种有呋喃构形的D-果糖经β-2，l糖苷键脱水聚合而成，且在果糖残基（F）末端连有一个葡萄糖残基（G）的直链结构多糖【1】。此外，据有关文献报道，菊粉还含有少量另一类果聚糖（inulonose）——末端无连有G的果聚糖。 菊粉酶（inulinase）是一类水解酶，能够水解β-2，l-D-果聚糖果糖苷键，学名β-2，l-D-果聚糖酶，也可称为β-果聚糖酶，或者2，l-D-果聚糖水解酶（EC 3．2．l），菊粉酶可以在一定的温度条件下水解菊粉成果糖或低聚果糖【2】。在土壤、水和动物消化道中的多种微生物都能分泌，可见分泌菊粉酶的微生物在自然界中分布如此之广。 菊粉酶根据不同的分类方法分类也不同。 根据菊粉酶在微生物体内的分布分类:菊粉酶在微生物体内主要分布于细胞内、细胞壁和细胞外，根据其分布不同分别称为胞内酶、胞壁结合酶和胞外酶。它们的比例主要受菌种、碳源、温度和pH的影响。其影响如下：l）随着温度的升高胞外酶比例下降，而其他两种酶比例上升；2）以菊粉或蔗糖为碳源培养微生物时，前者胞外酶比例高于后者，其他两种酶则相反；3）胞外酶主要由真菌合成，细胞壁结合酶主要产自酵母；4）适当的pH使细胞壁通透性增大，提高了胞外酶比例，其他两种酶比例下降。 根据作用底物方式的不同:根据作