肺癌个体化检测及质控教程方案.ppt

EGFR基因突变检测方法的选择 DNA 测序在部分地区仍然是EGFR 检测的金标准 其他方法，比如ARMS可能比直接测序更敏感，目前已被广泛应用 新的EGFR基因检测方法层出不穷，其检验效能有待进一步考证 优化检测途径，最大限度提高检测敏感性、降低假阳性 和假阴性率以获得可靠的检测结果对每个患者来说都至关重要 关于EGFR突变检测共识（中华病理学杂志 2011年10期） 关于EGFR检测时间 活检：1小时内送病理科 及时固定于4%中性甲醛中 小标本6-12h 大标本6-48h 病理报告3个工作日（包括免疫组化） EGFR 5-7个工作日 总共10个工作日，完成全部诊断和检测工作 关于EGFR突变检测共识 DNA提取： PCR扩增成败最关键步骤 建议采用正规公司的DNA提取试剂盒 DNA提取质量比数量更为重要 建议对提取DNA模板做质量检测OD值 DNA标本质量不符质量，阳性则罢 阴性要注明。 组织切片中要有200-400个细胞 5-10um切片 10张 EGFR突变检测病理质控 2011年11月15日1成立卫生部分子病理质控中心 非小细胞肺癌EGFR基因突变的检测共识 结直肠癌和非小细胞肺癌K-ras基因突变的检测共识 开展分子病理质量控制检查 全国EGFR基因突变质量控制检测 国内选择几个大的检测中心（上海、北京、广州等）开展前期工作质量控制检测 参检单位： 北京协和医院 北京医科院肿瘤医院 四川华西医院 广东省人民医院 上海中山医院 上海肿瘤医院 上海胸科医院 中山大学一医院 中山大学肿瘤中心 江苏省中医院 成都军区昆明总医院 南京军区总医院 浙江邵逸夫医院 中国医科大学一附院 等20家医院 EGFR-01 19Del、L858R、T790M EGFR-02 G719X、S768I PCR反应最常见、最重要的污染物是PCR产物。 UNG酶可以选择性水解断裂含有dU的双链或单链DNA中的尿嘧啶糖苷键，形成的有缺失碱基的DNA链，在高温下会进一步水解断裂，从而被消除。 UNG酶的最佳活性温度为40-50℃，95℃灭活。 尿嘧啶-N- 糖基化酶(UNG酶 ) （uracil-N-glycosylase） 防污染热启动PCR试剂盒以dUTP取代dTTP，所以PCR产物都是含有dU的DNA链。 在PCR开始前增加42℃的保温步骤，UNG酶可作用于已有的U-DNA污染物，消除由于污染DNA产生的扩增，从而保证扩增结果的特异性，准确性。 UNG酶在高温下被灭活,不会再降解新扩增的产物U-DNA。 UNG酶防污染体系 模板 污染 primer primer 特异性条带 非特异性条带 污染 U U U U 模板 UNG酶 + primer primer dA dT dG dC U 特异性条带 U U U U U U U U U U U U U U U U 基因检测报告 基因检测结果 检测方法 阳性结果： （丰度判定参考值） 阴性结果要备注如下 被检标本的基本病理学状态：标本种类；肿瘤细胞数量；所占比例等 提取标本的OD值 由病理医师签发！ * 现已知道占19及21外显子突变能预测易瑞沙的敏感性，其它位点的突变与易瑞沙疗效间的关系还不非常明确，证据也很有限或尚无证据，而最常见的耐药基因为外显子20的T790M突变。 * * * PMID:* * * * 那临床上EGFR突变检测都涉及哪些步骤呢？ 首先是就诊时采集合适的组织标本，然后选择合适的检测方法，最后根据检测结果制定治疗方案 * * 那临床上EGFR突变检测都涉及哪些步骤呢？ 首先是就诊时采集合适的组织标本，然后选择合适的检测方法，最后根据检测结果制定治疗方案 目前非小细胞肺癌组织取样的方法主要包括三种，分别是术中活检、适用于中央型的支气管镜活检、以及适用于周围型肺癌的引导穿刺活检。 一般临床上都会先考虑从最容易获取的地方来获取标本。最好使用原发病灶组织，如果不能从肿瘤原发病灶获得标本，也可以考虑从转移癌，胸腔积液和血浆中获取标本。 * * * * 现介绍下送检标本的一般注意事项 * * * * * 那临床上EGFR突变检测都涉及哪些步骤呢？ 首先是就诊时采集合适的组织标本，然后选择合适的检测方法，最后根据检测结果制定治疗方案 克唑替尼: 概述 名称: PF通用名: 克唑替尼 商品名: XALKORITM 化学式: C21H22Cl2FN5O 作用机制: 竞争性ATP 抑制剂 主要靶点: ALK、c-Met、ROS 2011年8月26日美国FDA批准用于A