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超微量分光光度計 (NanoDrop Spectrophotometer) 壹、用途說明 ND-1000 一、簡介 ND-1000超微量分光光度計是NanoDrop的第一個產品，應用液體的表面張力特性，只需要1~2ul樣品，在偵測台上，經上下臂的接觸拉出固定的光徑（1mm及0.2mm）達到快速、微量、高濃度、免石英管、免毛細管等耗材偵測吸收值的優點。此產品設計受專利保護，並在全世界廣受歡迎，其準確度與便利性讓科學家得以更有效率進行各項研究（網頁連結：/nd-1000-testimonials.html）。 ND-1000使用高能量氙燈（pulsed xenon flash lamp）可提供220~750nm的全光譜偵測，且不需要暖機，開機後可立即使用。搭配高感度CCD array偵測器，偵測吸收值可高達75Abs（dsDNA濃度2~3700ng/ul），大部分純化後的核酸幾乎都不需要稀釋即可偵測。 待測樣品的均質性是ND-1000的最高要求，一般核酸、蛋白質樣品能在偵測前以vortex mixer震勻為最佳，若無vortex mixer也應以pipette吸放數次混勻。若擔心genomic DNA可能因前述動作而斷裂，則改以55?C加熱約一分鐘，使樣品在偵測前呈現均勻狀態。 偵測時選擇不同偵測模式，可以得到最快速的結果： Nucleic Acid – 吸收光譜、230nm, 260nm, 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸濃度。 UV-Vis – 220~750nm間所有波長的吸收值及光譜（以1mm光徑吸收值呈現）。 濃度範圍： 樣品種類 最低濃度 最高濃度 (超過此濃度請稀釋樣品) 再現性 (五重複以上) 核酸 2 ng/ul 3700 ng/ul (dsDNA)3000 ng/ul (RNA)2400 ng/ul (ssDNA) 濃度範圍在 2-100 ng/ul 時，SD為 ± 2 ng/ul濃度範圍大於 100 ng/ul 時，CV為 ± 2% 純BSA 0.10 mg/ml 100 mg/ml 濃度範圍在 0.05-10 mg/ml 時，SD為 ± 0.10 mg/ml濃度大於 10 mg/ml 時，CV為 ± 2% 二、使用方法舉例 dsDNA： 在主畫面點選Nucleic Acid，依軟體跳出對話框動作（確認台面清潔，並在偵測台上點1ul二次水，放下上臂後再按OK）完成電腦與儀器連線。依照DNA所溶於之液體準備該溶液（務必確認DNA溶於二次水、TE buffer或哪一組kit的elution buffer）取出1.5~2 ul點在偵測台上，放下上臂後再按Blank。在右上方拉選Sample Type DNA-50，在Sample ID位置輸入樣品名稱，將樣品混勻，取出1.5~2 ul點在偵測台上，放下上臂後再按Measure。《示範影片》 結果： DNA濃度即以65.003 x 50 = 3250.1算出。 260/280介於1.8~2.0通常代表此為較純的DNA（隨DNA組成不同會有差異）。 260/230高於260/280，介於1.8~2.2通常表示純化過程殘留污染物較少。若欲察看220~340nm間其他波長的吸收值，可使用滑鼠拉動位於230nm的直線，或在右邊λ處輸入其他數值。 三、結果整理： 當次偵測完的所有樣品可按Show Report得到，此report可另存為ndj檔案，使用excel開啟。不同天的結果，可從Data Viewer內選Import Samples，將欲放在同一份report內的樣品挑選出來產生一份新的report。《示範影片》 四、注意事項： 1. 嚴禁使用測定蛋白質 2. 偵測後立即使用拭鏡紙（Kimwipe類）擦拭台面。先取一張將上下台面的液體吸走，再將此laboratory wipe吸過樣品的面反折到內部，折疊四次後以單方向多次擦拭台面（DNA 擦 5次，Protein 擦 20次）。《示範影片》 3. 同一滴液體只能做一次偵測，欲重複定量同一樣品，請擦掉前一滴，重新取出一滴進行偵測。 4. 基本上核酸樣品可使用1~2ul做測量，隨各液體體積特性之不同會有不同體積需求，原則上不超過 2ul。並請使用2ul pipette避免體積不足導致液柱無法完整形成。唯蛋白質樣品因呈色劑與蛋白質本身特性，務必使用2ul進行偵測。 5. 當軟體跳出錯誤訊息時，請詳細閱讀並依指示進行障礙排除。最常發生的情形是在偵測過程液柱並未正確形成，軟體會出現以下訊息。可先用肉眼觀察液柱是否未完整連接上下台面，或樣品內有泡泡，將上臂拉起後，擦掉該滴樣品，再重新進行偵測，必要時可將樣品體積加大至2u