I型胶原对3T3L1前脂肪细胞分化的影响和机制研究.pdfVIP

I型胶原对 3T3-L1前脂肪细胞分化的影响及机制研究 中文摘要 I I型胶原对 3T3-L1前脂肪细胞分化的影响 及机制研究 中文摘要 第一部分 I型胶原在脂肪组织中表达的变化 目的： I型胶原（type I Collagen, Col I）是细胞外基质的重要成分之一，它在脂肪细胞 外基质大量表达。但是它在脂肪组织表达的差异性尚无报道。本研究通过观察正常体 重人和 C57/BL6 小鼠，及肥胖人体和高脂喂养诱导肥胖小鼠皮下脂肪与内脏脂肪组 织中 I型胶原的表达，分析 I型胶原与肥胖之间的关系。 材料与方法： 选取 5名正常体重和 5名肥胖择期胆囊手术者及 12只雄性 C57/BL6小鼠其中普 食对照组（NC）6只和高脂喂养组（HFD）6只的皮下脂肪和内脏脂肪组织，Western blot 方法检测皮下脂肪和内脏脂肪组织中 I型胶原的表达水平。并分析其与体重的关 系。 结果： 1、I型胶原在人和小鼠皮下脂肪及内脏脂肪组织中均有表达。 2、肥胖患者内脏脂肪组织 I 型胶原表达量低于皮下脂肪组织，并且均低于正常体重 者内脏脂肪和皮下脂肪组织，差异具有统计学意义（P0.05）。 3、高脂喂养小鼠内脏脂肪组织 I 型胶原表达量低于皮下脂肪组织，并且均低于普食 对照组小鼠内脏脂肪和皮下脂肪组织，差异有统计学意义（P0.05）。脂肪组织 I 型 胶原的表达与体重呈负相关关系。 小结： 1、I型胶原在人和小鼠皮下脂肪及内脏脂肪组织中均有表达。 2、肥胖者内脏脂肪组织 I型胶原表达较皮下脂肪降低，且均低于正常体重者。 3、高脂喂养组小鼠内脏脂肪组织 I 型胶原表达较皮下脂肪组织降低，且均显著低于 普食对照组小鼠。脂肪组织 I型胶原的表达与体重呈负相关关系。 第二部分 I型胶原对 3T3-L1前脂肪细胞分化的影响及其分子机制初探 目的： 观察 I型胶原（type I Collagen, Col I）对 3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂 肪细胞进程的影响，并初步分析其可能的分子作用机制。 材料与方法： 中文摘要 I型胶原对 3T3-L1前脂肪细胞分化的影响及机制研究 II 3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中加入I型胶原，组织蛋白酶K（Cathepsin k, CTSK）, 设立对照组（CON）、组织蛋白酶K处理组（CTSK）、I型胶原处理组（Col I）及I型胶原+组织蛋白酶K处理组（Col I+ CTSK）。采用MTT法检测3T3-L1前脂肪 细胞的增殖。油红O染色法观察分化成熟脂肪细胞形态学变化。Western blot和RT-PCR 方法检测分化成熟脂肪细胞中I型胶原，分化转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ （Peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ ）和CCAAT增强子结合蛋白α （CCAAT/enhancer-binding protein α，C/EBPα）蛋白和mRNA的表达，比较各组间其 mRNA和蛋白表达的差异。 结果： 1、不同浓度 I型胶原干预后，各组 3T3-L1细胞增殖较对照组无显著变化。 2、随 I 型胶原浓度升高油红 O 染色逐渐变浅，提示分化成熟的脂肪细胞逐渐减 少。 3、分化成熟脂肪细胞中 I型胶原 mRNA和蛋白表达水平随 1型胶原浓度升高呈 剂量依赖性升高，而分化转录因子 PPARγ 和 C/EBPɑ mRNA 和蛋白表达水平呈剂量 依赖性降低，且 I 型胶原浓度为 10-5mol/l 和 10-4mol/l 时与对照组比较有统计学意义 （P0.05）。 4、CTSK 处理组较对照组油红 O 染色加深，提示分化成熟脂肪细胞增多。并且 分化成熟脂肪细胞中 I 型胶原 mRNA 和蛋白表达较对照组降低，而分化转录因子 PPARγ 和 C/EBPɑ mRNA 和蛋白表达水平较对照组升高，差异存在统计学意义 （P0.05）。I 型胶原与组织蛋白酶 K 共同处理组，分化成熟脂肪细胞油红 O 染色较 I 型胶原处理组变深，提示分化成熟脂肪细胞增多。并且分化成熟脂肪细胞中 I 型胶 原 mRNA和蛋白表达较 I型胶原处理组降低， PPARγ 和 C/EBPɑ mRNA和蛋白表达 水平较 I型胶原处理组升高，差异存在统计学意义（P0.05）。 小结： 1、I型胶原在本实验中不影响 3T3-L1前脂肪细胞增殖。 2、I型胶原呈剂量依赖性抑制 3T3-L1前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化,下调分化 转录因子 PPARγ和 C/EBPɑ的表达，同时伴随 I型胶原表达升高。 3、组织蛋白酶 K促进脂肪细胞分化，与 I 型胶原共同干预后，分化成熟脂肪细 胞 I型胶原，分化转录因子 P