范例二全血DNA提取步骤的改进(精选).docVIP

赛默飞世尔特约之2010实验创新技术大奖报名表 姓名： 职位： 单位： 系所/科室： 联系电话： E-mail： 通讯地址： ××× 邮编： ××× 参选项目： 全血/血浆DNA提取步骤的改进 背景： 血浆和血清是检测释放入血的游离核酸最主要的标本来源，用来检测病毒、细菌，以及肿瘤细胞等等释放出来的游离核酸和蛋白质产物，在临床上被广泛应用于病原微生物和肿瘤标志基因的检测中，如，PCR 和定量real-time PCR以及RT-PCR ；用于基于血液样品的癌症生物标记的研究和验证、检测；病毒和细菌核酸检测等。目前在市面上有多种抽提试剂盒。对试剂盒方法和传统苯酚氯仿抽提法进行对比有如下改进。 方法改进： 改进一：试剂盒提取法，在标准的做法中，蛋白酶K直接被加入溶液体系，消化血液或血清中的蛋白和DNA酶是十分重要的步骤，这一步的好坏直接决定所提取核酸的应用。大部分的试剂盒在这一步骤选用蛋白酶K来消化蛋白和DNA酶。经过试验对比发现，将蛋白酶K加入体系后，在37℃水浴中孵育1h会大大提高DNA的提取质量。 改进二：用传统的Triton/Pheno提取法，对比发现，用传统的方法提取有利于确保提取的DNA保持天然状态，获得更多小片段的DNA。在这一方法中，将Triton X-100加入血浆或血清中后，98℃水浴5min，再冰浴5min，最后用苯酚-氯仿-异丙醇（24:25:1,V:V:V）分离抽提DNA。这一改进方法中，小小的改进在于98℃水浴5min，这一步不仅可提高DNA提取率，还有利于下游的实验，因为高温将降低PCR抑制剂的活性。 结果： （附图片） （左边为传统方法提取，右边为试剂盒提取） 改进的方面（可多选）： 能过去之不能 □ 实验结果更好 □√ 节省实验经费 □√ 节约时间 □ 是否原创： 是 □ 否 □√ （若了解，请注明原创者）：谢菲尔德大学临床医学院