脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验报告模板三.doc

微生物实验报告 实验目的 1、掌握培养基制备的原则和一般方法。 2、掌握病原菌的分离与培养方法。 3、掌握油镜的正确使用、细菌涂片标本的制备、革兰氏染色法，熟悉细菌基本形态。 4、熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。 5、掌握血浆凝固酶试验的原理、方法及用途。 6、熟悉药物敏感性试验方法的种类、原理及应用，掌握纸片扩散法。 7、掌握玻片凝集试验的原理、方法、结果观察与判断。 二、实验器材 1、天平、称量纸、干粉培养基、锥形瓶、量筒、15支试管、试管架、试管筐、5ml刻 度吸管、平皿、洗耳球、酒精灯 2、脓汁标本1支，粪便标本1支；伊红美兰平板2个，营养琼脂平板2个，伊红美蓝 平板2个，接种环，酒精灯 3、斜面4支、细菌分离培养物（上次实验平板） 4、斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1 本，载玻片4张，染色瓶，染色架 5、斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4 个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把 6、半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。 方法与步骤 1、培养基的制备： 培养基 称量干粉培 养基(g) 水量(ml) 煮沸(次） 分装(ml) 备注 营养琼脂 11.4 300 2瓶，500ml锥形瓶，平板 营养琼脂 2.9 75 3 5 15支，中试管，斜面 营养肉汤 1.1 50 1 1 15支小试管，液体 半固体琼脂 1.7 60 3 3 15支，小试管，高层 干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里，然后罩上硫酸纸、牛皮纸，用 橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到髙压蒸汽灭菌室→灭菌（用于倒平板的培养基不用加热溶解，摇匀即可） 2、细菌的分离培养 平板划线分离法 甲→脓汁标本→营养琼脂平板(黄色）乙→脓汁标本→营养琼脂平板(黄色） 丙一粪便标本一伊红美蓝平板(紫色）丁一粪便标本一伊红美蓝平板(紫色） 方法：（1)右手拿接种环（如握笔式)，烧灼灭菌，欲伸入试管内的接种环杆部分亦要 迅速通过火焰2~3次，以杀灭其表面细菌；（2)左手握住盛有标本的试管的下端，右手以无名指、小指与手掌在火焰旁拔出试管棉塞并挟住之，将管口迅速通过火焰三次灭菌；（3)立 即将已灭冷却的接种环伸入试管内，沾取标本（或菌液）一环，试管口火焰灭菌后塞好棉塞; (4)左手斜持平板，略开盖，在酒精灯火焰左前方约5~6cm处，将接种环上的菌液涂抹于平板表面的边缘部分；（5)烧灼接种环，冷却后，从原涂抹部分开始，连续平行划线，每次只划平板的1/4~1/5，划毕后接种环再经火焰灭菌，冷却后用同样方法在平板其余部分划线， 每次划线要与前次划线重叠1-3条，共计3^次（区)；（6)接种完毕，将接种环烧灼灭菌后方可放下；（7)将培养皿倒置，37°C培养34小时后，观察结果。 3、细菌的纯培养 斜面接种分工 甲→普通平板→黄色菌落→1支斜面 乙→普通平板→白色菌落→1支斜面 丙→EMB平板→紫黑菌落→1支斜面 丁→ EMB平板→粉红菌落→1支斜面 方法：接种环→套住菌落→轻刮取菌→接种环取菌后，伸入斜面底部，自下向上先拉 →条细菌接种线→再伸入底部，自下向上，作蜿蜒划线→细菌涂布接种在斜面培养基的表面 →斜面正面上2/3作标记：组号、颜色→收集平板-灭菌桶内（平板底部朝下，盖朝上放置）→速送灭菌室→高压蒸汽灭菌→洗刷。 4、细菌的形态学检查 涂片→干燥→固定→染色 (1)涂片→干燥→固定 甲→黄色，紫黑。 乙→白色，粉红。 丙→黄色，紫黑。丁→白色，粉红。 方法：涂片：①接种环取盐水3ulX2滴，水滴间距小于2cm;②取菌苔少许（1mm小菌落半个）与盐水混勻，涂成大于lcm2;③涂毕→环移至涂膜中央侧立，待环内菌膜破裂，接种环烧灼灭菌。→干燥→固定：手持载玻片→端，涂膜朝上，两个涂膜快速通过火焰外层3次，时间2?3秒钟。 (2)革兰染色 涂片→干燥→固定→结晶紫→初染1分钟→水洗→卢戈碘液→媒染1分钟→水洗→ 95%乙醇→脱色约20秒钟—7尺洗—稀释品红—复染1分钟—水洗—吸干，镜检。 油镜使用方法：10X物镜—看清标本—滴加香柏油—100X油镜—浸泡油 中→模糊物象→细调节调焦，观察物像→记录结果→关闭电源→擦镜纸拭去香柏油 —擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3)混合液擦拭→擦镜纸擦拭油镜。 5、液体培养基接种（肉汤接种） 甲→黄色，乙→白色， 丙→紫黑，丁→粉红。 方法：（1)接种环斜面取菌，在靠近液面的管壁上，上下研磨接种；（2)在管壁上， 将接种环内的菌膜拍破。退出接种环，烧灼灭菌；（3)标记：组号，颜色 6、细菌的生化试验等 a.细菌的糖发酵试验 甲—紫黑菌苔—①葡萄糖 乙—紫黑菌苔—②