课件动物细胞工程3.pptVIP

二、动物细胞融合与单克隆抗体 灭活病毒诱导细胞融合的原理： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。 结合药物的单克隆抗体 细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。 淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能在体外无限增殖；骨髓瘤细胞中只有D途径，可以在体外无限增殖。 将这两种细胞在试管中混合，可以获得两两融合的细胞。 如何从融合的细胞中分离出杂交瘤细胞？ 将杂交瘤细胞在细胞培养板上培养。测定时，加入相应的抗原等物质，检测各孔的上清液中细胞分泌的抗体，产生有色反应的为阳性。 将杂交瘤细胞（细胞表面携带抗体）固定于微孔板上。测定时，加入抗原、酶标抗体，清洗游离的成分之后，加入酶促反应底物，产生有色反应即为阳性。 有限稀释法 分离单一的杂交瘤细胞 * 细胞融合是正常的生命活动 两个细胞正在融合 受精作用 人工条件下，如何促成动物体细胞的融合？ （一）动物细胞融合 细胞融合诱导剂： 灭活的病毒、 （其它物理化学手段同植物体细胞杂交） 灭活的病毒 有丝分裂 应用： 主要用于制备单克隆抗体 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 主要用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 细胞膜的流动性 细胞融合的原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较 如果患者想知道自己是否得了乙型肝炎，一般是先检查血液里是否有病毒的蛋白质，也就是病毒的抗原等 2 1 A B C 血清中的抗体 有时患者体内无乙肝病毒，但是用血清抗体进行检验时，会出现相应的免疫反应（即假阳性）。 如何得到单一的抗体A或B？ 人们获得抗体的传统方法是什么？ 细胞融合、细胞重组、杂交瘤技术 细胞融合 将两个或多个细胞结合形成一个细胞（杂交细胞）。 细胞重组 把不同细胞的部件重新组装，包括核移植、叶绿体移植、核糖体重建及线粒体装配等。 杂交瘤技术 通过细胞融合产生特异杂交瘤细胞，用于生产单克隆抗体。 单克隆抗体制备的原理及流程 （二）单克隆抗体 1）注射特定抗原 4）筛选杂交瘤细胞 3）杂交瘤细胞特点 1 制备过程： 5）细胞培养（克隆） 6）提取单克隆抗体 2 单克隆抗体的优点： 特异性强、灵敏度高 ① ② ③ ④ ⑤ 2）效应B细胞+骨髓瘤细胞→杂交瘤细胞 ⑥ 1）作为体外诊断试剂 3 应用 2）运载药物 如制备生物导弹 鼠源性的 嵌合的 用于治疗是很受限制的。原因是： 人源性的 对鼠源化抗体进行改造