第十二章胚胎工程分析.ppt

第12章 胚胎工程 提要 胚胎工程的理论基础：胚胎发育 胚胎工程的主要操作对象：生殖细胞、受精卵、早期胚胎细胞。 胚胎工程的研究内容：体外受精、胚胎移植、胚胎分割、胚胎体外培养、胚胎冷冻保存、动物性别控制。 一、胚胎发育 （一）、发育 个体发育（ontogeny）：自受精卵开 始到形成成熟个体所经历的一段过程。 发育 系统发育（phylogeny）：同一起源的 生物群的形成历史。 （二）、胚胎发育的基本过程 受精 卵裂 囊胚的形成 原肠腔的形成 中胚层及体腔形成 胚层分化 1、受精 1.1 精子和卵子的产生 卵子的成熟 1.2精子和卵子的结构 1.3受精 即：精子与卵子融合成受精卵的过程。 主要包括以下几个过程： 精子的获能（capacitation）、 顶体反应（acrosome reaction）、 皮层反应（cortical reaction）、 原核形成和融合 受精的早期事件 引自Janice P. Evans 2002 精子的获能 刚排出的精子虽有运动能力，但不能穿过卵子的放射冠和透明带，只有接受雌性生殖道的分泌物（获能因子），才具有受精能力，这种作用称为精子获能。 在体外条件下，血清白蛋白（serum albumin）、高密脂蛋白（high-density lipoproteins）、氨基聚糖（glycosaminoglycans）、孕酮、钙离子载体（A23187）、ZP3、CO2等均可促进精子获能。 顶体酶原转化为有活性的顶体酶。 顶体反应 获能的精子首先借助头后部（顶体后区）透明质酸酶活性穿过卵母细胞外卵丘细胞层（放射冠），到达透明带，然后精子通过头前部（顶体区）质膜表面的ZP结合蛋白与卵母细胞透明带发生识别，完成结合过程，诱发顶体反应，即：顶体以外排的方式释放出水解酶，将卵子的透明带和卵黄膜溶解，形成精子穿过的通道 皮层反应 精子进入卵子后，在精子接触点上，磷脂酰肌醇信号途径启动，产生DAG和IP3。IP3导致内质网中的钙离子释放钙信号进而引起皮层反应，即：卵细胞膜下的皮层颗粒（内含酶类的囊泡），以外排的方式，进入卵黄膜和卵膜之间的腔隙，酶类引起透明带“硬化”，形成受精膜。 多精受精阻断 受精后通过两种机制阻止多精进入，一是膜瞬间去极化；二是通过皮层反应，破坏精子受体和形成受精膜。 多精进入会形成多余的分裂极和纺锤体，导致细胞异常分裂而使胚胎发育终止 。 原核形成 精子的刺激使处于休眠状态的卵子被激活，重新回到减数分裂阶段，迅速完成第二次分裂，释放极体。此时精子和卵子的细胞核分别称为雄原核（male pronucleus）和雌原核（female pronucleus）。 融合 两个原核逐渐在细胞中部靠拢， 核膜随即消失，染色体混合， 形成二倍体的受精卵（fertilized ovum） 又称合子（zygote）。 2、卵裂 卵裂（cleavage）是指受精卵经过分裂，将卵质分配到子细胞的过程，分裂产生的细胞叫做分裂球(blastomere)。 哺乳动物的卵裂较慢，受精1天后才开始卵裂，8细胞之前，分裂球之间结合比较松散，8细胞之后突然紧密化（compaction），在64细胞以前为实心体，称为桑椹胚 。 3、囊胚的形成 在128细胞阶段，细胞团内部空隙扩大，成为充满液体的囊胚腔（blastocoel），此时的胚胎称为囊胚，或是胚泡。 5、胚层分化 外胚层形成神经系统、表皮、皮肤腺、毛发、指甲、爪和牙齿等； 中胚层形成骨骼、肌肉、泌尿生殖系统、淋巴组织、结缔组织、血液； 内胚层形成呼吸系统、消化道、肝、胰。 二、体外受精 （一）、体外受精概述 体外受精(In Vitro Fertilization)是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术，英文简称为IVF。由于它与胚胎移植技术(ET)密不可分，又简称为IVF-ET。在生物学中，把体外受精胚胎移植到母体后获得的动物称试管动物(test-tube animal)。 （二）、体外受精技术的发展简史 1878年，德国人Scnenk就以家兔和豚鼠为材料，开始探索哺乳动物的体外受精技术 。 1951年，美籍华人张明觉和澳大利亚人Austin同时发现了哺乳动物的精子获能现象，这一领域的研究才获得突破性进展。 1959年，张明觉以家兔为实验材料，从一只交配后12h的母兔子宫中冲取精子(即体内获能的精子)，从另外两只超数排卵处理母兔的输卵管中收集卵子，精子和卵子在体外人工配制的溶液中完成受精过程，然后，正常卵裂的36枚胚胎