金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测研究.docVIP

金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测研究 【摘要】 目的 探讨金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测的临床应用价值。方法 本次研究的对象是小白鼠， 将本院自制的金黄色葡萄球菌B型肠毒素作为免疫抗体， 研究这种抗体在产生过程中的作用， 采用金黄色葡萄球菌B型肠毒素间接竞争酶联免疫吸附试验（ELISA）检验方式对其进行检验， 总结出金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测在细菌霉素中检测的理论依据。结果 本院自制的金黄色葡萄球菌B型肠毒素纯度较高， 能够与金黄色葡萄球菌B型肠毒素的浓度呈现出线性关系。在本次研究过程中， 小白鼠最高效价为1：10000。从本次试验中发现， 当金黄色葡萄球菌B型肠毒素的浓度在2～1000 ng/ml范围中时竞争性抑制率与金黄色葡萄球菌B型肠毒素浓度10～450 ng/ml时样品中的金黄色葡萄球菌B型肠毒素浓度会随之增加。结论 采用金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测这种方式应用于检测中具有极强的价值， 灵敏度较高， 能够检测出样品中金黄色葡萄球菌B型肠毒素的残留情况。 【关键词】 金黄色葡萄球菌B型肠毒素；酶联免疫检测；临床应用价值；研究 DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.18.192 改革开放以来， 我国国民经济进入了快速增长的阶段， 随着人们生活水平的提高， 日常生活的饮食结构和消费观念产生了巨大的变化， 动物源性食品的比重在人们生活中所占有的比重越来越多。金黄色葡萄球菌B型肠毒素是重要的食源性和医源性双重致病菌， 经常存在于多种物质中， 这种病菌对营养物质水平的要求不高， 耐盐性较强， 大量聚集会产生食物中毒的情况发生。为了探讨金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测的临床应用价值， 本院特进行了一次研究， 取得了较为良好的效果， 现将具体情况报告如下。 1 材料与方法 1. 1 材料 本次研究中所使用的分光光度计主要由日本岛津提供， 型号为UV-265FW；在实验中ZFQ-85A型酶联免疫检测仪主要由华中电子管厂提供；研究中采用的离心机型号为TGL， 由北京医用离心机厂提供。金黄色葡萄球菌B型肠毒素主要由信阳农业高等实验室保存。牛血清白蛋白主要由华美公司提供。 1. 2 检测方法 1. 2. 1 金黄色葡萄球菌B型肠毒素的制备 金黄色葡萄球菌B型肠毒素的制备主要包括3个方面：①从琼脂板上挑选出单菌落， 将其接种到10 ml的培养液中， 需要保持培养环境的温度为37℃， 培养的时间为12 h， 得到种子液， 将1 ml含量的种子液接种到200 ml的培养基中进行培养， 培养的温度、时间与上述时间相同；②将培养好的金黄色葡萄球菌B型肠毒素菌液进行离心处理， 离心的速度为10000 r/min， 离心后取其上清液， 用滤膜过滤后放置在300 ml的滤杯之中 ， 用截留孔径为10 k的超模在氮气压力下对其进行浓缩处理， 浓缩成其原体积的1/10。需要注意的是， 氮气压力设置在0.2 MPa。液体浓缩好之后将其放置在冰浴之中， 根据体积的具体情况分次进行磁力搅拌并加入固体达到饱和度为60%的状态， 再冰浴4 h之后进行15 min的离心处理， 取上清液继续放置在冰浴中加入（NH4）2SO4， 将饱和度情况提高到85%， 放置在4℃的环境中即可。过夜后需要对取得的液体进行蛋白沉淀， 离心， 除去上清后加入其体积1/10的水重新溶解， 随后进行为期为24 h的透析；③根据仪器中的色谱柱相关要求对毒素进行纯化。 1. 2. 2 金黄色葡萄球菌B型肠毒素抗血清的制备 此种制备的方式主要包括2个方面：①在进行抗原注射前的1周对小白鼠进行皮内注射， 注射的药物为卡介苗， 这样能够刺激动物的免疫系统， 然后再进行抗原注射， 抗原注射使用的量为0.1 ml/次；②抗原注射后的1个月之后对小白鼠进行断尾， 采其血样， 将其放置在室温中进行凝血处理， 在4℃的环境下进行过夜， 采用转速为3000 r/min的速度进行离心处理， 离心的时间为5 min。 1. 2. 3 ELISA进行检测 按照ELISA的相关检测标准进行操作即可。 2 结果 小白鼠最高效价为1：10000， 当金黄色葡萄球菌B型肠毒素的浓度在2～1000 ng/ml之中时竞争性抑制率与金黄色葡萄球菌B型肠毒素浓度10～450 ng/ml时样品中的金黄色葡萄球菌B型肠毒素浓度会随之增加。 3 讨论 金黄色葡萄球菌B型肠毒素英译为Staphylococcal Enterotoxin B， 简称为SEB。金黄色葡萄球菌B型肠毒素经常会蕴藏在蛋白质、水分含量充足并且同时含有一定含量的淀粉之类的食物之中[1]。在日常生活中， 牛奶、大多数乳制品均符合金黄色葡萄球菌B型肠毒素生长的条件， 在牛奶中含有的金黄色葡萄球菌B型肠毒素具有极