系统性硬化症患者骨髓间充质干细胞的生物学特性.pfg.docVIP

㈣㈣㈣删㈣㈣ Ｙ１ ７７６１ ０ｉｊｉ 目  录 中文摘要…………………………………………………………………………………．．１ ＡｂｓｔＩ丑ｃｔ………………………………………………………………………………………………………………．３ 英文缩略词表……………………………………………………………………………．５ 前言……………………………………………………………………………………………………………………．７ 技术路线…………………………………………………………………………………．９ 第一部分ＳＳｃ患者骨髓问充质干细胞的分离纯化与鉴定…………………………．．１０ 实验材料…………………………………………………………………………………………ｌ０ 实验方法…………………………………………………………………………………………１ ５ 实验结果………………………………………………………………………………………一２２ ／ｊ、结……………………………………………………………………………………………………………………………．：：９ 讨论……………………………………………………………………………………………………………………………．３（） 第二部分ＳＳｃ患者骨髓ＭＳＣ对Ｔ细胞增殖的影响…………………………………３３ 实验材料…………………………………………………………………………………………３３ 实验方法………………………………………………………………………………………．．３５ 实验结果…………………………………………………………………………………………３８ ，Ｊ、结……………………………………………………………………………………………………………………………．４ １ 讨论……………………………………………………………………………………………………………………………．ｄ１２ 全文结论…………………………………………………………………………………．４４ 致谢…………………………………………………；．．．……………………………一……………………………．４５ 参考文献…………………………………………………………………………………４６ 综述……………………………………………………………………………………………………………………………………４８ 中文摘要 研究目的 建立ＳＳｃ患者骨髓间充质干细胞（ＭＳＣ）体外分离扩增的方法，并初步研究 ＳＳｃ患者骨髓ＭＳＣ的一般生物学特性和免疫调节功能。 研究方法：通过密度梯度离心和贴壁筛选法从ＳＳｃ患者和对照骨髓中分离 ＭＳＣ，从形态、表面标志和多向分化潜能等方面进行鉴定，通过描绘生长曲线，流 式细胞术ＰＩ染色检测细胞周期研究其生长特性。通过混合淋巴细胞反应和淋巴母细 胞转化实验研究ＳＳｃ患者ＭＳＣ的免疫调节功能，用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＭＳＣ免疫相 关因子的表达。 研究结果 １．通过密度梯度离心和贴壁筛选法从骨髓中分离出纺缍状形态均一的ＭＳｃ，ＳＳｃ 患者骨髓ＭＳＣ扩增能力有限，传代６次以后逐渐衰老。 ２．流式细胞术检测ＭＳＣ表面标志：ＣＤ３４、ＣＤ，纸ＣＤ３１、ＣＤ８３、ＣＤ８０、ＨＬＡ—ＤＫ（一）， ＣＤｌ６６、ＣＤ７３、ＣＤｌ０５、ＣＤ９０、ＨＬＡ—ＡＢＣ（＋），ＳＳｃ患者ＭＳＣ表型与对照无明显差 异，与培养条件有关。经分选的细胞纯度达９０％以上。 ３．流式检测细胞周期显示：ＳＳｃ患者骨髓ＭＳＣ ９０％以上处于Ｇ０／Ｇ１期，在传代过 程中无明显改变，与对照无明显差异，符合干细胞的特性。 ４．ＳＳｃ患者和对照ＭＳＣ在特定诱导条件下均能分化为骨、脂肪等间质细胞。一些 ＳＳｃ患者表现出更强的成骨分化倾向。 ５．ＳＳｃ患者和对照ＭＳＣ在’定条件下均能轻度刺激异基因Ｔ细胞增箔，而抑制有 丝分裂原引起的Ｔ细胞增殖，呈齐Ｕ量依赖性，随ＭＳＣ浓度增加而明显。 ６．ＳＳｃ患者ＭＳＣ在ｍＲＮＡ水ｉ１７表达免疫调节榴芙因子，观察到部分患者ＭＳＣ的 巨噬系集落刺激因子（Ｍ．ＣＳＦ）和转化生长因子ｐｌ（ＴＧＦ—Ｂ１）表达水平有所降 低。 研究结论 １．ＳＳｃ患者骨髓中能分离扩增出纯度较高的ＭＳＣ，体外可传代６次以上，传代过 程中能保持干细胞的生物学特性。 ２．ＳＳｃ患者骨髓ＭＳＣ具有多向分化潜能，部分患者表现出成骨分化倾向。 ３．ＳＳｃ患者ＭＳＣ在一定条件下抑制Ｔ细胞增殖，旱剂量依赖性。 ４．ＳＳｃ患者ＭＳＣ在ｍＲＮＡ水平表达免疫调节相关因子。 关键词：系统性硬化症，Ｉ’日Ｊ充质干细胞，发病机制，免疫调节，细胞因子 Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｏｎ ｅ  Ｍａｒｒｏｗ．Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｍｅｓｅｎ ｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｓｃｌｅｒｏｓｉＳ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃ讯ｅ： Ｔｂ