乙肝疫苗生产发展简介答题.pptVIP

疫苗的 生产1，灭活死疫苗 患者---分离出致病微生物（细菌或者病毒）-----通过培养细菌（培养基）或者病毒（细胞），获得大量的致病微生物---用甲醛灭活（杀死）致病微生物---纯化---铝吸附-----灭活死疫苗。 2，减毒活疫苗 患者---分离出致病微生物（细菌或者病毒）-----通过改变培养条件，获得不再致病微生物---培养不再致病微生物，获得大量的不再致病微生物---铝吸附-----减毒活疫苗。 乙肝病毒的体外培养至今没有成功 前面，我们已经讲过，细菌要在培养基中繁殖，病毒要在细胞中繁殖，比如，流感病毒在鸡胚细胞中生长，狂犬病毒要在地鼠肾细胞中生生长，乙脑病毒要在vero细胞中生长。可是乙肝病毒在所有实验过的细胞中都不能生长。乙肝疫苗的研究受到了严重的困难。人们不得不寻求其他的途径去生产乙肝疫苗。 乙肝抗原的来源 1，乙肝患者的血液：血源性乙肝疫苗。 2，利用DNA重组技术构建重组微生物（酵母）表达（合成）乙肝抗原：基因工程乙肝疫苗 乙肝疫苗发展历史 1, 1963年Blumberg发现在血友病患者的血清中存在一种抗体，这种抗体能与澳大利亚土著人血液中的一种抗原起交叉反应，这种抗原被命名为“澳大利亚”抗原。 2, 1968年Prince在血清型肝炎（乙型肝炎）患者血清中发现抗原性与澳大利亚抗原相同的病毒样颗粒，进而初步认定澳大利亚抗原就是乙肝表面抗原。 3, 1970年Dane用电子显微镜在乙肝患者血清中发现直径为42nm完整乙肝病毒颗粒及直径为22nm的球形和杆形的乙肝表面抗原。 4, 1971年Krugman发现加热处理的急性期乙肝患者的血清能部分预防乙肝感染。 5, 1981年Merck公司在世界上首次研制成功第一代乙肝疫苗——血源性乙肝疫苗。 6, 1985年北京生物制品研究所在国内首次研制成功血源性乙肝疫苗. 7, 1986年Merck公司在世界上首次研制成功第二代乙肝疫苗-----重组酵母乙肝。 8, 1989年北京生物制品研究所与Merck公司签订合同，引进重组酵母乙肝疫苗工业化生产技术。1993年5月开始试生产。 9, 90年代德国莱茵生物技术公司发展了一种甲基营养型酵母---汉逊酵母表达系统,其乙肝表面抗原表达水平可达到500-1000mg/L.南韩绿十字疫苗公司应用该表达系统实现了重组汉逊酵母乙肝疫苗的大规模工业化生产。 10, 大连高新（汉信）生物制药有限公司从1998年开始重组汉逊酵母乙肝疫苗的研制工作，在2002年6月获得了国家药品监督管理局颁发的“新药证书”，在2003年开始商业化生产。 11 ,华兰生物在2009年也将开始重组汉逊酵母乙肝疫苗的生产。 乙肝疫苗的发展历史 基因工程乙肝疫苗 乙肝疫苗的发展历程： n80年代初期-----血源性乙肝疫苗（第一代乙肝疫苗）。1995年停产。 n80年代中期----基因工程乙肝疫苗（第二代乙肝疫苗）。包括： 重组酿酒酵母乙肝疫苗，表达水平不理想—50mg/L。5ug/0,5ml的成人剂量偏低，抗体滴度偏低。 重组CHO细胞乙肝疫苗，表达水平低，2-5mg/L，母婴阻断效果不理想 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1-3mg/L，无法实现工业化生产。 n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的基因工程乙肝疫苗。 国外主要的乙肝疫苗生产厂家 国内主要的乙肝疫苗生产厂家 国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较 新乡华兰，大连汉信，北京天坛 华兰：菌种好，表达水平高，纯化收率高，所以，总体而言，华兰公司的技术更为先进。 北京生物制品研究所(天坛生物)生产的乙肝疫苗的基本情况： 生产技术：从美国MERCK公司引进。 年产量：1000万人份，3000万支。 生产设备：从美国购进。 基本技术资料： 菌种：重组酿酒酵母 表达水平：50mg/L 表达效率：1,35%(表面抗原蛋白/酵母总蛋白） 纯化收率：20% 发酵罐工作体积：500L 一次发酵所得抗原量：50mg/Lх500L=25g 纯化后所得抗原量25gх20%=5g 可生产疫苗量5,000,000/5=1,000,000支 北京天坛的 弱项和不足：表达水平低，抗原数量少，每剂疫苗只含5微克或10微克的抗原，比华兰疫苗抗原含量少一倍，所以抗体滴度低和抗体持续时间较短。 北京天坛和新乡华兰表达 水平和抗原产量的比较 北京天坛和新乡华兰疫苗抗原含量和抗体反应的比较 大连汉信和新乡华兰纯化步骤和纯化收率的比较 汉逊酵母和啤酒酵母的比较 重组汉逊酵母的特点 （甲基营养型酵母） 甲基营养型酵母：以甲醇为唯一能源和炭源的酵母。 1,多个HBsAg基因拷贝被整合到染色体中，遗传稳定性好。 2,发酵过程中不产生乙醇，