石墨化碳纤维―离子液体复合物构建过氧化氢酶传感器研究.docVIP

石墨化碳纤维―离子液体复合物构建过氧化氢酶传感器研究 　　【摘 要】选取两种结构相似的离子液体（1-羧甲基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、1-羧丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐），分别与石墨化碳纤维混合研磨制备复合材料，扫描电镜显示所制得的复合物均呈凝胶形态。复合材料修饰电极后，分别对过氧化氢酶（Cat）分子进行自组装结合，羧甲基离子液体-石墨化碳纤维复合物能够较好地促进Cat的直接电子传递，在-0.46 V （vs. SCE）处表现一对可逆的氧化还原峰，且对酶底物过氧化氢呈现灵敏的电催化传感响应。 　　【关键词】石墨化碳纤维；离子液体；过氧化氢酶；生物传感器 　　石墨化碳纤维或离子液体修饰电极都可以有效提高电极性能[1-2]。在过氧化氢酶研究领域，Pamula E 和Rouxhet PG细致研究了碳纤维吸附过氧化氢酶（Cat）的行为及影响因素，发现碳纤维的表面功能对过氧化氢酶的吸附具有一定的影响，含有生物相容性基团的碳纤维对过氧化氢酶表现较好的吸附性能[3]。Saadati， S（Saadati， Shagayegh）等将过氧化氢酶与氨基化离子液体层层组装到钛基纳米管表面，探究了过氧化氢酶的直接电子传递行为，以及构建在电子传递基础之上的过氧化氢传感器，充分体现了其灵敏性与生物相容性[4]。Chen等进一步研究了离子液体和DNA的复合物对几种氧化还原蛋白质的电子传递促进行为，研究发现离子液体对蛋白质分子具备很好的生物相容性，实现了蛋白质和电极之间的直径电子传递行为，为构建相应的生物传感器奠定了很好的前期基础[5]。电化学还原制备的氧化石墨烯修饰电极后，可以进一步促进过氧化氢酶的吸附和电子传递，结合的过氧化氢酶对过氧化氢具备非常灵敏的催化性能，线性范围为0.05 到 1.91 uM，灵敏度达7.76 uA mM-1 cm-2[6]。 　　至今，石墨化碳纤维-离子液体复合物修饰电极构建过氧化氢酶的研究还未见报道，开展该领域的实验具有一定的探索意义和研究价值。本项目将首先制备石墨化碳纤维-离子液体的复合材料，并将其用于过氧化氢酶的电子传递研究领域，探讨酶结构和性能、组建新型传感器。 　　1 实验部分 　　1.1 仪器和试剂 　　CHI-660B型电化学工作站（上海辰华仪器公司）；S-4800型扫描电子显微镜（日本日立公司）。石墨化碳纤维GNFS（中国科学院成都有机化学有限公司），使用之前经浓硫酸-浓硝酸混合液（体积比3：1）进一步纯化；1-羧丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、1-羧甲基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐（IL），中国科学院兰州化物所）；过氧化氢酶Cat（美国Sigma公司），用时当天配制；实验室用水为超纯水。 　　1.2 复合材料的制备及修饰电极构建 　　取15μL 1-羧丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐和5 mg GNFS于玛瑙研体A中，取15μL 1-羧甲基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐和5 mg GNFS于玛瑙研体B中，各研磨1小时，放置30min后，分别将它们转移至离心管，超声清洗、离心，去除未结合的离子液体，得到石墨化碳纤维1-羧甲基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐复合物（记做GNFS-IL（A））和石墨化碳纤维1-羧丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐复合物（记做GNFS-IL（B）），分别分散到5ml水中备用。取6mgCat溶解于1ml中，制得6 mg/ml（前后形式一致）的Cat溶液。 　　取上述各分散液20 μL滴到磨平、洗净、晒干的玻碳电极表面，自然挥发后，形成薄且均匀的修饰层，即制得复合物修饰（玻碳）电极（GNFS-IL（A）/GCE， GNFS-IL（B）/GCE）。之后，各修饰电极浸入6 mg/ml的Cat溶液中，过夜，取出水洗，待用。 　　1.3 实验方法 　　电化学检测采用三电极体系：复合物修饰（玻碳）电极为工作电极，饱和甘汞电极（SCE）为参比电极，铂电极为对电极。以0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液（PBS）为底液，通入纯氮气除去溶解氧、并保持氮气氛围。实验均在室温下进行。 　　2 结果与讨论 　　2.1 复合物的扫描电镜特征 　　纤维是指长度比直径大千倍以上且具有一定柔韧性和强力的纤细物质。图1分别是GNFS-IL（A）和GNFS-IL（B）复合物的扫描电镜（SEM）图。从图中可以看出：两种复合物中已基本观察不到GNFS的纤维结构，并且在一定程度上表现出黏连的现象，在GNFS-IL（A）图中表现得比较清晰，有大片粘在一起的形态，整体呈片状，且片状面积较大。而相较于GNFS-IL（A），GNFS-IL（B）局部图则比较整齐规则，出现了小范围的黏连，片状面积较小，除了小碎片状的形态，还有一些条状的形态。以上特征的出现主要是由于GNFS和IL之间的结合，IL的凝胶膜引发了GNFS表面形态上的变化。