食品中菌落总数的测定实验.doc

食品中菌落总数的测定实验 实验目的： 了解稀释平板计数的原理，掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法，认识细菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。 二、原理 平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位 colony-forming units，cfu 而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是这种计数方法最大的优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验，以及食品、饮料和水等含菌指数或污染度的检测试剂仪器 样品 pH 7.0±0.2。 将所有成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121 ℃高压灭菌15 min。 注：用平板计数琼脂，称取23.5 g于1 000 ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121 ℃高压灭菌20min，冷却至45~47℃左右备用。 2）无菌生理盐水：氯化钠（NaCl）5.875g 蒸馏水 纯净水 500ml 称取5.875ｇNaCl溶于500ml蒸馏水中，121 ℃高压灭菌20min。 3.器材 100ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、天平、称样瓶、记号笔、酒精灯等。 操作 1.样品的稀释：25 g ml 样品+225 ml 稀释液，均质。 10倍系列稀释。每递增稀释一次，换用 1 次1 ml 无菌吸管或吸头。（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面）选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液，各取1 ml分别加入无菌培养皿内。吸取 1 ml 空白稀释液作空白对照。每皿中加入15 ml～20 ml 平板计数琼脂培养基，并转动平皿使其混合均匀。 2.培养：待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ±1 ℃培养48 h±2 h。水产品 30 ±1 ℃培养 72 h±3 h。（如果有弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约 4 ml），凝固后翻转平板。） 3.菌落计数：记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。 五、计算 式中： ∑C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数； n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数； d——稀释因子（第一稀释度）。 实验数据： 10-1 3 10-2 1 空白 0 NaCl水 0 10-1 0 10-2 1 琼脂 0