生物技术制药讲解.doc

第一章 生物技术制药总论 1、现代生物制药的研究内容应包括：基因工程制药；细胞工程制药；酶工程制药；发酵工程制药；蛋白质工程制药。 2、生物药物主要有蛋白质、核酸、糖类、脂类等。 3、限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA。（是非题） 4、基因工程制药的基本步骤主要由三大部分组成，即上游技术，下有技术和质量控制。 （1）上游技术 1、目的基因的获取 2、构建DNA重组体 3、DNA重组体转入宿主菌 4、阳性工程菌株的筛选 （2）下游技术 1、工程菌发酵表达 2、表达产物的分离纯化工艺 （3）质量控制 1、结构组成、各种理化、生化性质。 2、安全性、稳定性和生物活性。 第二章 基因工程制药 基因工程制药:获取目的基因、目的基因的重组、构建表达系统、培养工程菌。 2、大肠杆菌表达系统是第一个用于重组蛋白生产的宿主菌。 3、λ噬菌体能够携带的外源DNA片段长度较大，而且其感染能力也大于质粒转化细菌的能力，所以λ噬菌体一直被作为基因组文库和cDNA文库的克隆载体。 4、α-互补法（蓝白菌落） 5、以包涵体形式存在的蛋白质分子不具有正确的天然三维结构，表达蛋白不具有生物活性，因此在纯化过程中必须溶解包涵体并对表达蛋白进行复性。 6、菌体细胞的收集与破碎中的化学方法最常用的是碱和表面活性剂，碱可以有效地释放菌体中的蛋白质，缺点是引起目的蛋白的不可逆变性。（是非题） 7、周质表达蛋白是介于细胞内可溶性表达和分泌型表达之间的一种表达形式，它可以避开细胞内可溶性蛋白和培养基中的蛋白质杂质，在一定程度上有利于蛋白产物的分离纯化。 第三章 细胞工程制药 体细胞重编程指的是分化的体细胞在特定的条件下被逆转后恢复到全能的状态，或者形成胚胎干细胞系，或者进一步发育成一个新的个体的过程。 细胞融合技术 是用自然或人工的方法使两个或几个不同细胞融合为一个细胞的过程。 核移植技术 是将1个动物的细胞核移植到卵细胞中发育生长。 植物细胞的全能性 植物细胞经过分裂和分化后仍具有形成完整有机体的潜能或特性。植物细胞只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的遗传基础，在适当的条件下可以通过分裂、分化再生成一个完整的植株。 第四章 酶工程制药 酶是由活细胞产生的具有特殊催化功能的生物大分子，分为蛋白酶类和核酸酶类这两类酶分子中起催化作用的主要成分分别是蛋白质和核酸。 酶催化反应具有以下特点：专一性强，效率高，条件温和。 药用生产酶的方法主要有提取分离法（Extraction）、生物合成法 Biosynthesis 以及化学合成法 Chemical synthesis 。 大肠杆菌最早用于酶生产细胞。 固定化酶最大特点：既具有生物催化剂的功能，又具有固相催化剂的作用。 固定化酶的优点？ 可多次使用，而且在多数情况下，酶的稳定性提高。 反应后，酶与底物和产物分开，产物中无残留酶，易于纯化，产品质量提高。 反应条件易于控制，可以实现转化反应的连续化和自动化控制。 没的利用效率高，单位酶的催化的底物量增加，用酶量减少。 比水溶性酶更适合于多酶反应。 催化抗体 是抗体的高度选择性和酶的高效催化能力巧妙结合的产物，本质上是一类具有催化活力的免疫球蛋白，在其可变区赋予了酶的属性，因此催化抗体也叫抗体酶。 抗体酶与天然酶相比其优势在于？ 抗体酶有更强的专一性和稳定性 抗体酶能催化那些天然酶不能催化的反应 不仅提供了人工生物催化剂，而且提供了研究生物催化过程的新途径 第五章 发酵工程制药 发酵工艺设计的关键技术是对微生物代谢调控的研究。 在制药微生物的培养基中，除了水、氧气、碳源、氮源、无机盐及微量元素、生长因子等一般微生物生长所必须营养外，有时还需要在培养基中加入一些促进药物产物合成的物质，如前体、诱导物、促进剂与抑制剂。 药物高产菌株或分泌新型特效药物菌株的选育包括了自然选育和人工选育两种方法，后者又分为诱变育种、杂交育种和基因工程育种等方法。 微生物的发酵过程 分批发酵生长周期——生长阶段 延迟期 （2）指数生长期 （3）指数生长期 （4）静止期 衰亡期 第六章 蛋白质工程制药 蛋白质工程制药的核心内容就是收集大量的蛋白质分子结构的信息。三维空间结构的测定是炎症蛋白质设计的假设即证明是新的结构改变了原有的生物功能的必须手段。 国外许多研究机构正在致力于研究蛋白质与核酸、酶抑制剂与蛋白质的结合情况，以开发具有高度专一性的药用蛋白。 蛋白质定向进化技术（directed evolution）它不需要事先了解蛋白质的三维结构及作用机制，而是在体外模拟自然进化的过程（随机突变、重组和选择），是基因发生大量变异，并定向选择出所需性质或功能的蛋白质，从而在几天或几周内实现自然界需要几百万年才能完成的事情。