116第十六章 基因工程药物课件.pptVIP

第十六章 基因工程药物 第一节 表达系统的特点和选择原则 原核细胞 酵母细胞 昆虫表达系统 哺乳动物细胞 转基因动物 一. 大肠杆菌表达体系 大肠杆菌表达体系的优点： 基础生物学、遗传学、分子生物学背景清楚 安全性好 寄主菌株及载体较多 外源基因可以高水平表达 培养方便、价廉、可大规模生产 问题： 转译后的加工修饰 真核细胞的某些蛋白质翻译合成后，还需要修饰，如糖基化，但大肠杆菌细胞无此功能。 细菌蛋白酶的存在 细菌蛋白酶对外源蛋白质的切割 Epo 慢性肾功能衰竭导致的贫血、恶性肿 瘤或化疗导致的贫血、失血后贫血 IFNβ 多发性硬化症 表皮生长因子 碱性成纤维细胞生长因子 血管内皮细胞生长抑制因子 基因工程药物举例 胰岛素 第一个上市的基因工程药物。1982年，美国Ely LiLi公司使用大肠杆菌生产人胰岛素。 表达策略 ①A B链分别表达 两个工程菌株，表达产物再混合，经处理后连接成有活性的胰岛素。 缺点：由于胰岛素有三个二硫键，正确配对的机率低，最终的收率低于20％，导致生产成本高。 ② 人胰岛素原表达法 利用融合表达载体，将编码人胰岛素原的基因片断克隆在β－半乳糖苷酶基因的下游，转化大肠杆菌，表达融合蛋白。用溴化氰裂解融合蛋白，得到人胰岛素原。经体外折叠，形成正确空间结构，再用胰蛋白酶切除C肽，得到有生物活性的胰岛素，生产成本比①法降低70％。 LiLi公司用此法年产10余吨胰岛素。 重组人生长激素 来源 脑垂体前叶（生产来源 人遗体脑垂 体，动物中除灵长类的生长激素不可用于人类） 结构特点 非糖基化 生理功用 促进骨骼、内脏和全身生长。 用途 治疗儿童侏儒症、烧伤、骨折、创伤、出血性溃疡、肌肉萎缩、骨质疏松等。 1985年，美国FDA批准大肠杆菌生产的重组人生长激素上市，现在每年的生产量可达数十公斤。 研究认为，长期小剂量（0.8IU/d）使用生长激素，可延缓机体各系统的衰老速度，使人的寿命延长20年。 每日注射太麻烦，现在正研究口服制剂。 人生长激素的结构与性质 含191个氨基酸，其中4个半胱氨酸形成2个二硫键，多肽链N端为苯丙氨酸。 最早投放市场的重组人生长激素其N端为甲硫氨酸，生物学活性与天然的人生长激素相同，但是容易诱导患者体内产生生长激素的抗体。 新一代的产品N端是苯丙氨酸，价格较贵，但仍受临床医生和患者的欢迎。 两种方法生产 ①构建带有信号肽的表达载体，表达出的多肽链在通过细胞内膜时，信号肽和甲硫氨酸一同被切下。 由于信号肽的切割不完全，此法的产率较低 ② 体外切除法 带有甲硫氨酸的多肽链，用 特异性的酶切割。 如 氨肽酶M (AP-M) * 选择原则 1.生物活性 制备的目的是为了治疗疾病，因此产品必须具有良好的生物活性。如果无法用原核表达系统表达出具有生物活性的产品，就需用真核表达系统，甚至用哺乳动物细胞来表达。 2.生产成本 企业是追求利润最大化的。降低生产成本是主要的方法。因此在保证生物活性的前提下，尽量采用成本低的表达系统。如大肠杆菌表达系统、酵母表达系统。 已批准生产的细胞因子多肽药物 药物名称 适应症 IFNα 白血病、Kaposi肉瘤、肝炎、恶性肿瘤、 AIDS IFNγ 慢性肉芽肿、生殖器疣、恶性肿瘤、过敏性 皮炎、感染性疾病、类风湿关节炎 G-CSF 自身骨髓移植、化疗导致的粒细胞减少症、 AIDS、 白血病、再生障碍性贫血 GM-CSF 自身骨髓移植、化疗导致的血细胞减少症、 AIDS、再生障碍性贫血、MDS 已批准临床试验的细胞因子多肽药物 IL-Iα 放疗、化疗所致的骨髓抑制、恶性肿瘤 IL-1β 放化疗所致的骨髓抑制、癌症、促进伤口愈合 IL-3 骨髓衰竭、血小板缺乏、自身骨髓移植、化疗佐 剂、外周血干细胞移植 IL-4 免疫缺陷、恶性肿瘤、疫苗佐剂 IL-6 放化疗所致血小板减小、恶性肿瘤、疫苗佐剂 M-CSF 恶性肿瘤、白血病、骨髓移植、降胆固醇 TNF 恶性肿瘤 干细胞因子（SCF）骨髓衰竭 TGF-β 炎症 IL-11 血小板减少症 IL-1 受体拮抗剂、败血性休克，类风湿关节炎 PLXY321 骨髓衰竭 *