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苎麻木质纤维高效降解菌的分离与鉴定 　　摘要： 利用羧甲基纤维素钠培养基，从腐烂苎麻秆堆中分离到1株高效纤维降解细菌，形态学观察结合16S rRNA基因分子鉴定。结果表明，该菌属于蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus），发酵进行产酶的最适温度和pH分别为42 ℃和7.0，在该条件下，于100 mL发酵体系中发酵降解苎麻纤维，发酵96 h 后纤维素酶活力达到最高值24.3 U/mL，发酵8 d后其纤维降解率为45.1%。 　　关键词：苎麻纤维；纤维素酶；16S rRNA；Bacillus cereus 　　中图分类号：S563.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）03-0565-04 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.03.014 　　Isolation and Identification of Highly Efficient Degrading Strain of Cellulose in Ramie 　　WANG Chao-qun，CHEN Hong-gao，ZHANG Yun-peng 　　（School of Environmental Engineering， Wuhan Textile University，Wuhan 430020， China） 　　Abstract： A cellulose degrading strain J04 was isolated from rotting ramie straws by using sodium carboxymethylcellulose as a sole carbon source and identified as Bacillus cereus by morphological observation combined with 16S rRNA gene sequencing. The results showed that the optimal temperature and pH for cellulase producing of J04 was 42 ℃ and 7.0， respectively. The highest cellulase activity reached 24.3 U/mL when J04 was grown in a ramie fiber medium for 4 days. About 45.1% was degraded after 8-days incubation under the optimal conditions. 　　Key words： ramie fiber； cellulase； 16S rRNA； Bacillus cereus 　　随着石油资源的日益枯竭、全球能量的需求持续增长和城市空气污染的日益严峻，可再生燃料和燃烧后释放温室气体较少的生物燃料正在成为化石燃料的理想替代品。纤维素是地球上最丰富的可再生有机物资源和重要的生物能源原料。芒草、麻类作物、作物秸秆和木材废料等都含有丰富的纤维素成分[1]，作为第二代生物能源技术，欧美各国正在将纤维资源利用重点研发[2]。 　　纤维素酶（CMC）是实现纤维素降解的关键酶，只有纤维水解成了可溶性糖，才能被微生物发酵转化成生物能源[3]。由于真菌纤维素酶不如细菌纤维素酶那么复杂，容易分离纯化，目前主要用真菌来生产纤维素酶，如木霉、曲霉、青霉、根霉和漆斑霉等[4]。然而，细菌纤维素酶也具有其独特的优势，如：细菌生长较快，比真菌更容易重组出较高产率的纤维素酶；细菌纤维素酶虽然复杂但同时也赋予其更多功能，在降解纤维时能够很好地协作；细菌纤维素酶比真菌纤维素酶更能适应酸、碱、热、盐等极端环境，具有更广泛的工业应用前景。因此，细菌纤维素酶最近正受到越来越广泛的关注[5]。研究较多的产纤维素酶细菌主要有Bacillus subtilis、Clostridium 　　acetobutylicum、Clostridium thremocellum和Pseud-ononas cellulose，关于Bacillus cereus降解纤维的报道并不多见。 　　本研究从腐烂苎麻秆堆中筛选出1株高效降解苎麻纤维的微生物，优化其发酵条件，研究其产酶特征，鉴定其种属，为苎麻生物量的高效利用探索途径。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 微生物 从咸宁湖北新农生态麻业有限公司园区一个长期露天堆置的苎麻秆堆中收集正在腐烂麻秆残渣约200 g，立即带回实验室用500 mL无菌水浸洗，然后用双层纱布过滤去除残渣，滤液4 000 r/min离心10 m