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马尾松松针有机溶剂提取物的抗氧化性研究 　　【摘 要】采用了机溶剂提取法，研究了溶剂种类、提取时间、料液比单因素进行提取马尾松松针有效物质，并探究了提取物抗氧化性，结果表明其对DPPH有较高的清除效果，对羟基自由基的清除不具稳定性。 　　【关键词】马尾松；提取；抗氧化性 　　0 前言 　　马尾松属松科植物， 是我国亚热带地区分布最广、 资源最大的树种松针营养丰富，资源富足，价格低廉，国内松针的工业应用发展很快。目前国内松针的产品主要运用在饲料添加剂、食品、医药、日常生活用品中，如松针粉、松针浸膏、松针叶绿素-胡萝卜素-软膏、粉状松针膏饲料添加剂、松针饮料、松针茶等等。有机溶剂浸提松针得到的浸膏，其可作为功能性肥皂、牙膏等的添加剂，也是松针食品、药品、化妆品研发的活性源料成分。本文初步探讨松针有机溶剂浸提物的抗氧化性，其为在医药、食品、环境方面的应用提供一定的导向。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 　　马尾松； 1，1-二苯基-2-苦基肼、邻二氮菲、硫酸亚铁、EDTA、双氧水、氮蓝四唑、核黄素、甲硫氨酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾，氯化钠、氯化钾、电子分析天平、SHZ-D（Ⅲ）循环水式多用真空泵； RE- 5298A 旋转蒸发仪、电热恒温水浴锅、UV-1800紫外可见分光光度计。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 提取物的制备 　　取新鲜松针5g粉碎置于圆底烧瓶中，加入一定量的溶剂，水浴加热回流提取，减压浓缩至20mL，得马尾松提取物。 　　提取工艺的选取：采用有机溶剂回流提取松针，进行了溶剂种类、提取时间、料液比单因素实验； 　　1.2.2 松针提取物抗氧化性能测定 　　待测液的制备：取待测提取物浓缩液20μL，50μL，100μL分别加蒸馏水配制成1mL。 　　1）DPPH（1，1-二苯基-2-苦基肼）的测定 　　DPPH溶液的制备：用70%乙醇配制成0.2mM的DPPH溶液。 　　提取物DPPH清除率的测定[1-2] 　　取制备好的待测液，分别加入2.0mL 0.2mM的DPPH溶液，充分混匀，室温下在黑暗处静置培养30min，采用分光光度法，在517nm处检测吸光度As。加入松针提取物以外的所有试剂，按照测定As的方法测定A0。加入DPPH以外的所有试剂，测定Ac。 　　DPPH自由基清除率（%）= （1-■）×100% 　　2）羟基自由基清除率的测定[3] 　　取5mM邻二氮菲溶液0.6mL，依次加入0.4mL pH7.4磷酸盐缓冲溶液，0.6mL硫酸亚铁溶液，0.6mL EDTA溶液，1.4mL蒸馏水，1mL样品溶剂，混合均匀，37℃保温1h，536nm处测定吸光度值A空白。 　　取邻二氮菲溶液0.6mL，依次加入0.4mL pH7.4磷酸盐缓冲溶液，0.6mL硫酸亚铁溶液，0.6mL EDTA溶液，0.6mL蒸馏水，1mL样品溶剂，0.8mL 0.1%双氧水，混合均匀，37℃保温1h，536nm处测定吸光度值A损伤。 　　样品制备方法同上，将损伤液配制中的1mL样品溶剂换成1mL样品。混合均匀后，37℃保温1h，536nm处测定吸光度值A样品。 　　羟基自由基清除率（%）=■×100% 　　3）超氧阴离子的测定[4-5] 　　参考GhiselliA和沈文飚等人的检测方法，并对方法加以调整。试管内依次加入0.5mL 0.2MpH7.8的PBS溶液，0.3mL5×10-5M核黄素，0.25mL 13mM甲硫氨酸，0.25mL 5.1×10-4M氮蓝四唑，0.7mL 0.1mM的EDTA， 1 mL样品溶剂，再加入蒸馏水，定容到4mL，40W日光灯照射于560nm处测定空白样的吸光度值A空白。将测定A空白时的样品溶剂换成不同浓度的样品溶液，测定样品的吸光度值A样品。 　　超氧阴离子清除率（%）=■×100% 　　2 结果与讨论 　　单因素提取实验抗氧化性研究： 　　2.1 溶剂种类 　　1）DPPH自由基清除效果 　　70%乙醇、60%丙酮的提取物对DPPH自由基具有较的的清除效果，其在选取的浓度范围内，增加提取物浓度对DPPH自由基清除率影响不大。 　　2）羟基自由基清除效果 　　70%乙醇的提取物对羟基自由基清除效果差，60%丙酮、乙酸乙酯两种溶剂的提取物对羟基自由基清除效果相对强些。 　　3）超氧阴离子清除效果 　　为溶剂种类对松针提取物清除羟基自由基的影响。三种溶剂中，70%乙醇、60%丙酮的提取物清除效果强些。总体上，提取物浓度对超氧阴离子清除效果影响不明显，三种溶剂的提取物对超氧阴离子都有一定的清除作用。 　　图1 提取时间对松针提取物清除DPPH、羟基自由基、超氧 　　图2 料液比对松针提取物清除DPP