一株烟草青枯病生防菌的筛选鉴定及其发酵优化.docVIP

一株烟草青枯病生防菌的筛选鉴定及其发酵优化 　　 摘要：以烟草青枯病原菌［茄科雷尔氏菌（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）］为筛选指示菌，采用平板共培养初筛和发酵上清滤液复筛的方法，筛选到烟草青枯病拮抗菌株ＸＬＡ０３，其抑菌圈直径为１３．７４ ｍｍ；经１６Ｓ ｒＤＮＡ鉴定，菌株ＸＬＡ０３为解淀粉芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）。由单因素试验和正交试验优化得到了菌株ＸＬＡ０３生物量较高的摇瓶发酵培养基配方为玉米淀粉 １５．０ ｇ／Ｌ、豆粕５０．０ ｇ／Ｌ、Ｋ２ＨＰＯ４?３Ｈ２Ｏ １．０ ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４?７Ｈ２Ｏ ０．７５ ｇ／Ｌ、ＭｎＳＯ４?Ｈ２Ｏ ０．０１0 ｇ／Ｌ ；培养条件为起始ｐＨ ７．０，接种量１％，装液量２０ ｍＬ／２５０ ｍＬ。 　　关键词： 烟草青枯病菌（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）；解淀粉芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）；筛选；发酵优化 　　中图分类号：S435.72；TQ458文献标识码：Ａ文章编号：０４３９－８１１４（２０１４）０８－1810－０5 　　 　　Screening and Fermentation Optimization of Antagonistic Bacillus against Tobacco Bacterial Wilt 　　 　　ZHAO Xiao-yan1,YANG Huan2, CHEN Jian-gang1,WANG Chang-jun3, JI Zhi-xia1, CHEN Shou-wen1 　　(1. State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, Huazhong Agricultural University , Wuhan 430070, China;2. Wuhan Leyang Biotechnology Co., Ltd.， Wuhan 430071, China;3. Hubei Tobacco Research Institute, Wuhan 430030, China) 　　 　　Abstract: One bacterial strain was screened ｆｏｒ ｉｔｓ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｓｉｚｅ ｏｆ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ ｃｉｒｃｌｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｂｙ ｔｈｅ ｄｕａｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｆｉｌｔｒａｔｅ ｔｅｓｔｓ，ａｎｄ ｎａｍｅｄ ａｓ ＸＬＡ０３． Ｉｔｓ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ ｃｉｒｃｌｅ ｃｏｕｌｄ ｒｅａｃｈ １３ ｍｍ． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ １６Ｓ ｒＤＮＡ， ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ＸＬＡ０３ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ． Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ａｎｄ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ， ａｎ ｏｐｔｉｍａｌ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｉｔｓ ｂｉｏｍａｓｓ－ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｆｌａｓｋｓ ｗａｓ ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ ｍａｉｚｅ ｓｔａｒｃｈ １５．０ ｇ／Ｌ， ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ ５０．０ ｇ／Ｌ，Ｋ２ＨＰＯ４?３Ｈ２Ｏ １．０ ｇ／Ｌ，ＭｇＳＯ４?７Ｈ２Ｏ ０．７５ ｇ／Ｌ，ＭｎＳＯ４?Ｈ２Ｏ ０．０１ ｇ／Ｌ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｗａｓ ｉｎｉｔｉａｌ ｐＨ ｏｆ ７．０， ｉｎｏｃｕｌｕｍ ｓｉｚｅ ｏｆ １％ ｌｏａｄｅｄ ｌｉｑｕｉｄ ｏｆ ２０ ｍＬ／２５０ ｍＬ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｔｏｂａｃｃｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｗｉｌｔ； Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ； ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ； ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ 　　烟草青枯病［病原物为茄科雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）］是一种典型的维管束病害，最显著的发病症状是烟草植株出现枯萎现象，危害期大多出现在烟草旺长期或者旺长期以后，根、茎、叶部均会受害［1，2］。经常发病产烟区的老病田或旱地烟田几乎每年都会发生，形成绝产无收和全田发病的现象，造成大面积烟草产量、品质下降，制约着烟草产业的发展［3］。目前防治烟草青枯病的方法主要包括化学防治、生物防治、加