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一、原理和结构 二、分离基础 一、原理和结构 原理： 当流动相携带样品流经色谱柱时，其与固定相发生相互作用。由于样品中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，各组分在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由色谱柱中流出。与适当的柱后检测方法结合，实现样品中各组分的分离与检测。 结构 二、分离基础 1、分离度： ★ R≥1.5称为完全分离 2.分离度和分离条件的关系 通过改变实验条件，可以系统地改变色谱图中任何两谱峰的分离。 因素一：流动相的组成（影响a和k） ①、改变溶剂强度： ②.溶剂的类型： 改变有机溶剂的类型，对反相和正相色谱来说，均是改变峰间距的有效手段。 改变流动性的PH，使用离子对或胺添加剂改变缓冲液或缓冲液的浓度（主要针对离子化合物），也可作为改变其选择性的方法。 加入络合剂 因素二：色谱柱（影响选择性a，柱效N） 优先考虑改变流动相，再考虑更换色谱柱。 色谱柱填料的性质对峰间距有重大影响，不同厂家生产的、不同规格、和不同填充剂的色谱柱都有较大差异。 因素三：温度（影响k和a） 柱温增加1℃，保留值k通常能减小1~2%，K的改变也能引起a的改变。 因素四：进样量（影响N） 随着进样量的增加，最终会使谱峰展宽，塔板数下降，样品分离度下降。 * 高效液相色谱基础 2015.03.31 *
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