基因工程常规技术-相互作用研究技术剖析.pptVIP

双杂交原理 X基因和Y基因产物的相互结合，导致reporter gene表达。 Reporter gene表达就可说明X基因产物与Y基因产物能结合。 GST pull-down 将GST融合蛋白 tagged protein 标记蛋白 or the bait 饵蛋白 ，GST, His6, Flag, biotin … 作为探针，与溶液中的特异性搭档蛋白 test protein, or prey被捕获蛋白 结合，然后根据谷胱甘肽琼脂糖球珠能够沉淀GST融合蛋白的能力来确定相互作用的蛋白。一般在发现抗体干扰蛋白质－蛋白质之间的相互作用时，可以启用GST沉降技术。该方法只是用于确定体外的相互作用。 荧光共振能量转移 蛋白质直接相互作用的荧光共振能量转移 Fluorescence Resonance Energy Transfer 活体细胞中实时地对生物大分子之间的相互作用进行动态监测. 两个携带不同荧光基团（如GFP、YFP、RFP等）的大分子在相互间距离足够近时会发生激发态能量非放射性地由一个荧光基团（供体）向另一个荧光基团（受体）转移的现象。 * 图 相互作用研究技术 在细胞的生命活动过程中，诸如DNA的复制与重组、mRNA的转录与修饰，以及病毒的感染与增殖等，都涉及到了特定的DNA区段与蛋白质结合因子或者蛋白质因子之间的相互作用。为了分析研究参与基因表达调控的DNA元