血液成分分离.ppt

实 验 一 一、淋巴细胞的分离 二、 细胞抗原片的制备 三、人血清分离 杜联峰 外 周 血 细 胞 淋巴细胞 单核-巨噬细胞 粒细胞 红细胞 血小板 一、淋巴细胞的分离 原理：根据淋巴细胞与血液中的其他细胞存在密度 差 异（比重差异），利用密度与淋巴细胞相 近且近于等渗的分离液（ficoll液）作密度梯度离心进行分离。 方法：聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法 （Ficoll分离液法） 目的：将淋巴细胞从外周血细胞中分离出来 分离液要求： ①对细胞无毒 ②基本等渗 ③有一定比重 （根据所分离物质选择分离液） 实验材料： 淋巴细胞分离液，离心管，刻度吸管，毛细吸管，抗凝管等。  实验步骤： 1、无菌采外周静脉血2ml加入抗凝管混匀、5分钟后加入Hank’s液2ml稀释血液。 2、将抗凝血沿管壁缓慢加入分离液中。 3、配平，放入水平离心机2000rpm离心10分钟 4、用毛细吸管吸取血浆与分离液处淋巴细胞，放入刻度离心管中。 5、加入Hank’s液至5ml,，2000rpm离心5分钟。弃去上清，沉淀为淋巴细胞 Ficoll分离液法 血浆 淋巴细胞 分离液 粒细胞 红细胞 2000 r/min 20min 稀释的抗凝血 淋巴细胞分层液 淋巴细胞 血浆 分层液 稀释液 红血球 二、淋巴细胞抗原片制备 吹铺 冷风 吹干 冷丙酮固定 5~15min 冷风吹干， 密封置－30℃ 以下低温保存 三、人血清分离 4℃冰箱保存 3ml 斜静置 30min 2000rpm 20min