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灯盏细辛活血化瘀成分筛选 　　摘要：中药活性成分的寻找和确定一直是中药药理学和中药化学研究的重点内容。本文根据中药化学成分与生物大分子发生亲和反应产生药理效应的原理，从数学角度提出寻找活性成分的方法。通过计算亲和常数来衡量各化学成分的亲和力，亲和力较大者为可能的活性成分。随后以灯盏细辛为例初步说明本方法应用的可行性，并发现8个峰（成分）是作用于血小板可能的成分，其中7号峰被指认为isochlorogenic acid B。本法的应用有望为中药活性成分的寻找提供新的策略。 　　关键词：活性成分 亲和力 指纹图谱 HPLC 灯盏细辛 　　中药（包括其复方）的作用具有多成分、多靶点、多途径的特征。针对此特征，用活性成分谱思路破解中药的安全性和有效性一文[1]相对完整地提出了中药活性成分谱的思想，也基于亲和原理对中药活性成分谱提出了理论性探索方法。本文试图从实践的角度探讨此问题的解决方式。由于中药的有效性是化学成分决定的，因此先从单一化学成分的作用方式进行分析。 　　1 单一活性成分作用的方式 　　中药作用的本质是化学成分与机体生物大分子相互作用的结果，作用的方式是通过亲和现象实现的。因此，某一活性分子的作用可以通过类似化学反应的方式来反映，相互作用达到平衡后则有反应式1和公式1。 　　（D表示游离状态药物分子，R表示未被结合的生物大分子，DR表示药物分子-生物大分子复合物，E表示效应） 　　KD表示解离常数，此处的单位是摩尔浓度，越小表示对形成复合物越有利。 　　公式2是分析化学药物与某一具体生物大分子相互作用产生药理效应的基础公式，适用于药物分子与受体、酶等生物大分子进行的反应，其中KD值越小表示此化学成分与靶分子的亲和力越强。实际上，公式2是米-孟方程（Michaelis-Menten Equation）的基础公式，在此也是我们分析中药活性成分的基础公式。 　　2 中药化学成分的检测 　　先假定提取到的中药成分都是可能的活性成分，因此中药提取物的成分可以采用HPLC指纹图谱的方式来反映，一个峰大体相当于一个化学成分，峰高（或峰面积）的大小则反映该成分的含量（浓度）。 　　3 理论求解 　　3.1 必要的假设 由于中药作用于机体的具体生物大分子尚未完全清楚，在采用公式2进行求解之前，为了简化问题，特提出必要的假设：①各中药成分之间无明显的相互作用；②各成分在与各自的靶分子相互作用时，无明显的竞争抑制作用；③化学成分与靶分子的亲和是双分子反应，不需要其它分子的介入；④只考虑各成分的直接作用，不考虑其代谢物可能参与的作用。 　　3.2 绝对求解 为了方便求解，可以将公式2进行变换得公式3和公式4。 　　公式3就是米-孟方程的双倒数变换（Lineweaver-Burk变换），而公式4就是Hanes变换。 　　为了求出[D]和[DR]，可以将不同浓度的中药提取物与同一可能的靶细胞（组织、器官）匀浆液充分相互作用，然后通过指纹图谱检测出[D]（游离药物）和[DT]（药物总量），随后根据公式5求出[DR]。也可以通过特殊方法直接检测[D]和[DR]。 　　[DR]=[DT]-[D]（公式5） 　　当获得[DR]和[D]后，即可以根据公式3或公式4作图计算出KD和[RT]。KD和[RT]是两个重要的常数，其中KD反映某一中药成分与靶分子间的亲和力，越小表示此成分与生物大分子的亲和力越强；[RT]是反映可能靶分子多少的参考值，值越大表明可能的靶分子越多。一般来讲，KD较小的成分活性较强，值得关注。 　　在实际工作中，根据公式3和公式4求KD和RT要求至少用2个不同浓度的提取物进行至少2次有效的亲和实验（最好3次以上），这样求的KD和RT较为可靠。然而绝对求解的前提是必须知道各指纹峰的分子量并能转化为真实的摩尔浓度。这一点有时很难做到，因此可以进行相对简化的求解，即KD`和[RT]`。 　　3.3 相对的简化求解 必须指出的是，公式3和公式4中的各分子浓度必须使用摩尔浓度，才能求得KD和[RT]的真实值；由于很多指纹峰很难直接指认，在筛选活性成分时更不可能知道其分子量（W）信息和交换因子（f）信息，这时可以用峰高（或峰面积）代入公式3或公式4进行计算，但求得的KD和[RT]会改变，对结果影响分析如下。 　　游离药物[D]（摩尔浓度）、药物总浓度[DT]和结合浓度[DR]与峰面积分子量存在公式6、公式7和公式8关系。 　　D为药物的游离浓度，Ai表示某峰亲和反应平衡后测得的峰面积，f表示交换因子，W表示分子量 　　DT为药物的总浓度，包括游离和结合；AT表示此峰未发生亲和测得的峰面积，f和W的意义同公式6 　　Ai、AT、f和W的意义同公式6～7 　　将公式8代入[RT]=[R]+[DR]得公式9。