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粘附NK细胞：全球治疗试验纵横 　　摘要：过继免疫治疗是当前医学研究的重点内容，在细胞免疫中，A-NK细胞作为肿瘤过继免疫治疗（AIT）中的一种新型免疫效应细胞，具有短期内大量增殖，调节机体免疫能力，抗菌，抗病毒，抗衰老，抗肿瘤的特点受到普遍关注，临床应用也显示出广阔前景。本文追踪国际上研究进展就有关A-NK细胞生物学特性，免疫调节及临床应用的研究现况及进展作以简要综述。 　　关键词：过继免疫治疗；A-NK；临床应用 　　中图分类号：R473.73 文献标示码：A 　　近年来，随着人类疾病治疗学的进展，过继免疫治疗（AIT）成为免疫生物治疗中的主要疗法之一。从80年代后期，LAK、TIL、NK、CTL、DC、CIK等效应细胞陆续被发现，国内外的基础和临床应用报道层出不穷。1988年美国Pittsburgh大学首次从LAK细胞群体中分离纯化了一种具有高效杀伤活性的LAK亚群，由于它具有粘附在塑料表面的特征将其命名为A-LAK（ad herent LAK）。之后， 随着A-LAK研究的深入和进展，我们发现其与LAK之间有着诸多不同之处， 而与NK细胞具有相同的表面标志，相似的生物学活性，本课题组近年多以A-NK（activated NKcells）代替A-LAK这个名称。 　　1 A-NK的生物学特征 　　A-NK可来源于人外周写单个核细胞（PBMNC）、骨髓、淋巴结、脾细胞、脐带血等，其中后两者是最好的A-NK来源。美国Pittsburgh大学Vujanovic课题组最初分离制备A-NK时提出，A-NK可能来源于大淋巴细胞，因为在形态、表型特征和生物学活性方面，二者具有同源性[1]。1990年Melder通过A-NK形态及超微结构研究指出，初次分离的A-NK在粘附相及非粘附相之间周期性波动。动态观察有无IL-2条件下常规NK的粘附状态表明，只有相当少的一部分NK（1%～10%）具有自发粘附到塑料表面的特性，但在6000IU/mlIL-2存在时，一部分（4%～30%）NK也可以迅速转化为粘附NK，24h后这部分细胞又失去粘附活性。因此，IL-2诱导NK粘附作用只是非常迅速的一个过程。A-NK的超微结构与高度活化的NK一致，所有的A-NK均为球形，表面有众多绒毛和伪足。在粘附相，A-NK也是可动的，一般可沿着固体表面移动1μm/min，1个极性末端是有皱而毛糙的边角结构，另一端绒毛呈线圈样。用透射电镜也证实A-NK结构高度极化，一端为细胞核，另一端为细胞浆，颗粒丰富，骨架结构较大，具有多囊泡小体和活跃的Golgi小体[2]。此后研究进一步明确，A-NK来源于成熟静息状态的NK亚群，占全部单个核细胞的1%～4%，占总NK的15%～50%，与未成熟NK或活化的终末NK细胞不同。A-NK代表了表型和功能独特的NK亚群。用流式细胞仪（FACS）进行A-NK表面标志分析显示，A-NK表达CD56dim -CD16dim -β2 intergrinsbrightIL-2Rp75+表型，A-NK和NK一样，其表面有多种复杂的粘附分子（CAM）存在，并与其生物学活性息息相关。为了评价CAM在A-NK粘附特性中起的作用大小，Melder发现CD11c，CD11a，CD18分子在活化的NK与内皮细胞相互作用中起关键作用，与A-NK粘附于肿瘤血管而短暂停留于正常组织的现象有关。也有学者证实CD18相关的层粘连素CD11a，CD11b，CD11c，CD2在A-NK与靶细胞的相互识别中起重要作用。Gunji Y指出A-NK是大颗粒淋巴细胞，表达NK细胞表型膜标志（asialo GM1+， NK1.1+， Qa5+， Ly-6.2+， Thy-1.2+，但Lyt-2.2 and L3T4阴性），具有相对较高的细胞毒性[3]。图1为本课题组提取活化的A-NK免疫效应细胞，它通过突触粘附至癌细胞（扫描电镜）。图2显示A-NK细胞聚集，粘附至癌细胞周围，形成花环状，肿瘤细胞呈现空泡变性，细胞膜损伤、溶解等坏死征象（透射电镜）。 　　2 A-NK的肿瘤治疗研究 　　2.1 A-NK体外增殖能力和抗肿瘤能力 A-NK优点主要有2点：①是抗肿瘤能力强；②是体外扩增能力强。在自体条件培养基（AuCM）存在条件下，A-NK可于20d内扩增130～1100倍，临床级A-NK扩增倍数稍低，但也可于8～14d内扩增10～22倍。以22nmol/mlIL-2诱导下是否能迅速粘附到实体表面的能力，NK被分为两种不同亚群，A-NK和NA-NK[2]。分别培养二者作动态比较，A-NK增殖能力始终强于NA-NK，但诱导力迟于NA-NK。在抗瘤能力方面，A-NK结合并杀伤K562和Daudi细胞的能力明显高于NA-NK，并能侵润到肿瘤细胞囊球内部杀伤肿瘤细胞。大量体外实验表明，A