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蜜环菌的化学成分研究 　　[摘要] 对蜜环菌 Armillaria mellea 发酵培养物的化学成分进行研究。采用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱等方法进行分离纯化，根据波谱数据及与对照品对照鉴定化合物结构。从蜜环菌发酵培养物中分离鉴定了10个化合物，分别为2-羟基-4-甲氧基-6-甲基苯甲酸（1），苔藓酸（2），蜜环菌戊素（3），麦角甾醇（4），染料木素（5），大豆素（6），胡萝卜苷（7），染料木苷（8），尿嘧啶（9）和甘露醇（10）。化合物1～10均为首次从蜜环菌发酵培养物中分离得到，其中，化合物1～4，6，10在蜜环菌菌丝体或菌索中已有报道。通过二维核磁波谱确证，首次报道化合物3以DMSO为溶剂的氢、碳谱数据，是对该类成分波谱数据的补充。 　　[关键词] 蜜环菌；口蘑科；化学成分 　　[收稿日期] 2013-04-08 　　[基金项目] 国家“重大新药创制”科技重大专项（2009ZX09308-003， 2009ZX09301-005）；中国中医科学院自主选题项目（2011xycz-11） 　　[通信作者] *闫利华，博士，副研究员，从事中药化学研究，E-mail： yanlihua2829@163.com；*王智民，博士，研究员，从事中药化学研究，E-mail： zhmw123@263.net，Tel/Fax：（010蜜环菌 Armillaria mellea （Vahl. ex Fr.） Quel.，别名蜜环蕈、榛蘑，隶属于口蘑科蜜环菌属，是一种与传统名贵中药天麻（tuber of Gastrodia elata ）共生的药食两用真菌。分布于中国的大部分省区，目前主要通过液体发酵法大量培育[1]。药理研究表明，蜜环菌发酵物主要具有镇静催眠、抗惊厥、保护心脑血管、改善眩晕综合症、增强免疫等作用[2-3]。现有的蜜环菌制剂主要以蜜环菌发酵物为原料，如晕痛定胶囊、天麻蜜环菌片等，用于治疗偏头痛、神经官能症、眩晕头痛、惊风癫痫、肢体麻木、腰膝酸痛等。 　　关于蜜环菌化学成分的报道集中于20世纪80年代初至90年代初，此后仅有少量研究[4-7]。实验材料集中在菌丝体，对子实体[5-6 ]、菌索[7]和发酵液[8-9 ]的成分报道很少。目前已知蜜环菌含有原伊鲁烷型倍半萜、二萜、甾醇、黄酮、有机酸、嘌呤、多糖等类成分[1]。但其药效物质基础仍不明确，也导致了蜜环菌及其制剂长期缺乏合理的质量控制指标。为了明确蜜环菌的主要药效物质，全面控制原料及其制剂的质量，确保临床用药的有效性、安全性，本实验对蜜环菌发酵培养物开展系统的化学成分研究，以期为蜜环菌及其制剂的质量控制与临床合理用药提供可资借鉴的依据。本文报道从蜜环菌发酵培养物中分离鉴定的10个化合物，分别为2-羟基-4-甲氧基-6-甲基苯甲酸（1），苔藓酸（2），蜜环菌戊素（3），麦角甾醇（4），染料木素（5），大豆素（6），胡萝卜苷（7），染料木苷（8），尿嘧啶（9）和甘露醇（10）。 　　1 材料 　　SGW X-4显微熔点仪（上海精密科学仪器有限公司），Reveleris 快速色谱系统（美国Grace公司），中压制备色谱仪（瑞士BUCHI公司），Bruker Avance 600核磁共振波谱仪（德国Bruker公司），Agilent 6130 SQ-MSD质谱仪（美国Agilent公司）。JHBE-50S闪式提取器（河南金鼎科技发展有限公司），薄层硅胶GF254和柱色谱硅胶（青岛海洋化工有限公司），Sephadex LH-20（美国GE公司），所用试剂均为分析纯。 　　染料木素对照品（批号111704～200501）购自中国食品药品检定研究院。蜜环菌发酵培养物（即蜜环菌粉，包含菌丝体和发酵液）由河南龙都药业有限公司提供，批20120418。 　　2 提取与分离 　　干燥的蜜环菌发酵培养物3.5 kg，用95%乙醇冷浸提取3次（16 ， 12 ， 12 L），每次12 h，每次冷浸后再用闪式提取器（4 000 r·min-1， 1.5 min）提取，提取液合并，减压回收溶剂，得浸膏425 g。浸膏经硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮（100∶1～3∶7）及氯仿-甲醇（7∶3～2∶8）梯度洗脱，得到24个部分（Fr. 1～Fr. 24）。其中，Fr. 4（1.23 g）经Sephadex LH-20柱色谱（氯仿-甲醇1∶1洗脱，下同）分离，得到化合物1（9 mg）。Fr. 5（1.57 g）经硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯（97∶3～95∶5）梯度洗脱，得到5个组分（Fr. 5-1～Fr. 5-5），Fr. 5-3和Fr. 5-4分别经Sephadex LH-20柱色谱纯化，得到化合物2（11 mg），3（64 m