美他多辛论文：他多辛对酒精性脂肪肝大鼠CYP2E1影响的研究.doc

美他多辛论文：美他多辛对酒精性脂肪肝大鼠CYP2E1影响的研究 【中文摘要】美他多辛是在国内上市不久,专一治疗酒精性脂肪肝病药物。临床上使用美他多辛主要用于治疗酒精性脂肪肝,对其预防作用考察的不多。通过调研文献发现CYP2E1与酒精性脂肪肝密切相关,但国内未有美他多辛与CYP2E1之间联系的研究。本课题欲通过构建酒精性脂肪肝大鼠模型,研究美他多辛对酒精性脂肪肝大鼠的预防作用,并探索其作用机制,研究美他多辛与CYP2E1的关系,分析CYP2E1是否是美他多辛的治疗靶点。方法：清洁级Wistar雄性大鼠30只,体重(200±20)g,每日给予大鼠标准食物和饮用水各2次,保持光照和避光循环饲养各12 h。将所有大鼠随机分为3组,分别为模型组10只,预防组10只,对照组10只。采用乙醇灌胃法建立酒精性脂肪肝大鼠模型：给予大鼠40%乙醇(剂量为乙醇8 g·kg-1·d-1)灌胃，每日2次,间隔8 h,至4 wk末。5 wk开始,将乙醇浓度增至50%(剂量为乙醇10 g·kg-1·d-1)，至8wk末。对照组：不灌服乙醇,每日2次给予等体积灭菌注射用水；模型组：1-8 wk建立酒精性脂肪肝大鼠模型的同时,在每次灌服乙醇1h后给予等体积灭菌注射用水；预防组：1-8 wk建立酒精性脂肪肝大鼠模型的同时,每次灌服乙醇1h后给予美他多辛(300 mg·kg-1·d-1)。给大鼠超声检查,采用全自动生化仪来检测血清指标,ELISA测定脂蛋白脂酶,HE染色观察肝组织病理学变化,油红O染色观察肝脂肪沉积,天狼星红染色染色观察肝胶原染色,蒽酮法测定肝糖原含量,肝组织免疫组化检测TNF-α、IL-6、CYP2E1的蛋白表达,蛋白印记法检测肝组织中CYP2E1蛋白含量,所得数据使用SPSS17.0统计分析软件。结果：大鼠酒精性脂肪肝模型建立成功,模型组有1只大鼠死亡,为酒精误吸入气管所致,其他组无大鼠死亡。模型组和预防组大鼠体重均有低,与对照组相比有显著性差异(P0.05)。肉眼观察对照组大鼠肝脏为鲜红色,边缘锐利,表面光滑,切面无颗粒感；模型组大鼠肝脏体积增大,呈暗黄色,切面油腻,肝包膜欠平整或呈锯齿状改变：预防组大鼠肝脏色泽比模型组浅,但较对照组略深。超声影像学显示对照组大鼠肝脏包膜光滑,回声均质,血管纹理清,肝脏大小正常；模型组大鼠超声检查示肝脏前场回声增强,后场回声衰减,亮度强,血管纹理不清,脂肪浸润。预防组大鼠超声检查示肝脏回声稍强,分布欠均匀,血管纹理较模型组显示清晰。HE、油红O、天狼猩红病理学染色显示对照组大鼠肝小叶完整,肝细胞呈多边形,围绕中央静脉呈放射状,肝窦清晰可见,肝索排列整齐,肝小叶汇管区基本结构清晰可见,肝细胞内无脂肪沉积,胶原组织少见；模型组肝细胞肿胀、气球样变,肝小叶中心脂肪液滴沉积非常严重,还可见大量红色条状胶原纤维,与对照组相比(P0.01)；预防组：可见有少量脂肪沉积,汇管区可见少量胶原组织。与对照组和预防组相比,大鼠酒精性脂肪肝模型组ALT、AST、TG明显升高(P0.01,P0.05),TC表达低(P0.01)。肝糖原含量预防组与对照组相比明显下降(P0.01),预防组大鼠肝糖原含量也低于对照组(P0.05),比模型组高,但无统计学意义。酒精性脂肪肝大鼠肝脏脂蛋白脂酶含量明显升高(P0.01)；模型组肝糖原含量下降,预防组大鼠肝糖原含量高于模型组(P0.01)。酒精性诱导脂肪肝后,TNF-α、IL-6水平均显著升高,与前人研究报道一致,而给予美他多辛可有效抑制TNF-α、IL-6的水平。CYP2E1免疫组化和western blot结果显示模型组表达与对照组相比增高(P0.05)；预防组CYP2E1表达较模型组明显减少,美他多辛显著抑制了CYP2E1的表达。结论：大鼠灌服酒精8wk,经超声学检查,病理学证实乙醇灌胃造模成功,酒精性脂肪肝的发病与CYP2E1的增高密切相关,CYP2E1与多种生理因子共同参与了酒精性脂肪肝病的发生和发展。预防组CYP2E1蛋白水平表达下降,说明美他多辛有效抑制了CYP2E1的表达。CYP2E1活性减弱,有助于酒精性肝病患者的肝功能朝良性循环发展。美他多辛对大鼠酒精性脂肪肝有较好的预防作用。 【英文摘要】Metadoxine (MTDX) is a new specific drug that is prescribed in healing alcoholic fatty liver disease in China. Though MTDX is widely used in clinic to treat alcoholic fatty liver, yet there are few studies put attention to its preventive effect.