舒肝宁注射液中黄芩苷和栀子苷的含量测定技术.docVIP

舒肝宁注射液中黄芩苷和栀子苷的含量测定技术 　　[摘要]目的： 建立高效液相色谱法测定舒肝宁注射液中黄芩苷和栀子苷含量。方法： AtlantisTM dC18柱，4.6×150mm，5μ；黄芩苷流动相为0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH2.8）甲醇（60：40），流速1ml/min，检测波长280nm；栀子苷流动相为甲醇水冰醋酸（20：80：0.5），流速1ml/min，检测波长238nm。结果： 黄芩苷和栀子苷线性范围分别为30～100μg/ml、30～150μg/ml，平均回收率分别为99.68%、99.66%。结论： 该法简便快速、结果准确，适合舒肝宁注射液的质量控制。 　　[关键词]舒肝宁注射液；含量测定；黄芩苷；栀子苷 　　中图分类号：R28 文献标识码：A 文章编号：？？？？？？？？？？？？？？？？ 　　舒肝宁注射液由茵陈、栀子、黄芩、板兰根和灵芝提取物制成的灭菌水溶液，主治清热解毒，利湿退黄，益气扶正，保肝护肝，是有效 治疗 各种病毒性肝炎的中药制剂，其主要有效成分为黄芩苷和栀子苷。有采用高效液相色谱法测定其黄芩苷或栀子苷含量的报道，但样品上柱运行周期较长，在15min以上。本研究建立舒肝宁注射液中黄芩苷和栀子苷含量测定的高效液相色谱方法，具有快速、灵敏、简捷、特异性强等特点，可以较好的消除有效成分之间的干扰。 　　1 仪器与试剂 　　Waters高效液相色谱仪（包括600四元梯度泵、在线脱气机、柱温箱、996二极管阵列检测器、 Empower色谱工作站），METTLER AE240 电子 分析天平（瑞士），METTLER 320酸度计（瑞士），洁恩普超声清洗器（上海），MS2振荡器（德国），PIERCE干热式样品浓缩器（美国），Millipore超纯水器。黄芩苷和栀子苷对照品由 中国 药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯试剂（美国TEDIA公司），其他试剂均为分析纯。舒肝宁注射液为贵州瑞和制药有限公司生产（批号分别为0409091、0411052、0503301）。 　　2 方法与结果 　　21 色谱条件 　　AtlantisTM dC18柱，4.6×150mm，5μm；黄芩苷流动相为0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH2.8）甲醇（60：40），流速1ml/min，检测波长280nm；栀子苷流动相为甲醇水冰醋酸（20：80：0.5），流速1ml/min，检测波长238nm。 　　22？ 溶液的制备 　　221？ 对照品溶液的制备 　　精密称取黄芩苷和栀子苷各对照品适量，适量甲醇溶解后，用水定溶，分别制成30、45、60、75、100μg/ml黄芩苷对照品溶液，30、60、90、120、150μg/ml栀子苷对照品溶液。 　　222？ 样品溶液的制备 　　精密量取供试品溶液2mL至25mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液作为栀子苷测定的样品溶液。再精密吸取上述滤液2mL置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为测定黄芩苷的样品溶液。 　　分别取黄芩苷和栀子苷对照品和样品溶液10μL，在上述色谱条件下进样，得上述两组分对照品和供试品溶液的色谱图，结果见图1，2。 　　23？ 线性关系考察 　　在上述色谱条件下对两个组分的系列标准溶液依次测定，以对照品的浓度作为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归分析。黄芩苷和栀子苷的回归方程分别为A=3.26×10-7C-0.01，r=0.9999； A=7.04×10-7C-0.002，r=0.9998。结果表明黄芩苷在30～100μg/ml内、栀子苷在30～150μg/ml内呈良好的线性关系。本文由教育大论文下载中心WwW.JiaoYuDa.CoM整理 　　24 精密度试验 　　按样品溶液测定的色谱条件用同一样品溶液重复进样（n=6），测定峰面积， 计算 黄芩苷和栀子苷的相对标准偏差（RSD）分别为0.98%和1.04%。 　　25 稳定性试验 　　取2.4项下溶液分别于0、2、4、8、12h进样，测定峰面积，计算RSD。结果表明样品在12h内稳定，黄芩苷和栀子苷的RSD分别为0.98%和1.05%。 　　26 回收率试验 　　用加样回收法在已知含量的舒肝宁注射液内，分别加入不同量的黄芩苷和栀子苷对照品，按2.2.2项下方法操作，得回收率试验用溶液，取10μL进样，计算回收率，结果见表1。表1 样品回收率（略） 　　分别取对照品和样品溶液，各取10μL进样，用外标法计算样品含量，结果见表2。表2 样品测定结果（略） 　　3 讨论 　　舒肝宁注射液的主要有效成分为黄芩苷和栀子苷，因此对其进行定量，明确其含量范围是控制其质量的关键。黄芩苷和栀子苷的理化特性和紫外特征吸收有较大差异，很难使其在常规条