DNA核酸技术总结.ppt

* 1. 原核生物的翻译起始过程 ⑴首先是核糖体小亚基形成30S的启始复合体 . ⑵30S的起始复合物与50S大亚基结合. * 二、肽链的延长(elongation) 当第一个启始甲硫酸tRNA 接到mRNA的起点密码上后,第二个负荷的tRNA2就通过反密码子与mRNA上的下一个密码子配对。 原核生物延长过程所需的蛋白因子称为延长因子 （elongation factor，EF）；真核生物的延长因子 称为eEF（eukaryotic elongation factor）。 P位即肽位（peptidyl site） A位即受位（acceptor site） 核糖体循环可分三个阶段：进位（entrance）（registration），成肽（peptide bond formation） 和转位（translocation） * ㈠ 进位（entrance） * ㈡ 成肽（peptide bond formation） * ㈢ 转位（translocation） * 三、肽链合成的终止 原核生物与真核生物的终止 过程相似 释放因子（release factor，RF） * 三、中心法则及其发展 * 1、脱落嘌呤等作用 生理温度和pH下，哺乳动物每天约失去1000个嘌呤碱基和几百个嘧啶碱基，形成AP（无嘌呤/嘧啶）位点； 第四节 DNA的损伤和修复(damage and repair) 一、DNA变异 * 脱氨作用 复制错误 2、脱氨碱基作用;能造成转换. 3、复制掺如错误碱基; 4、碱基缺失或插入; * 5、紫外线诱导产物-嘧啶碱基的二聚化pyrimmidine dimer 和 单双 链的断裂 7、一些诱变剂：DNA链的交叉连接 8、 * 1、光修复 嘧啶二聚体可通过可见光的光复活（photoreactivation）反应恢复为单体。 反应由光敏裂合酶催化（光复活酶，photolyase） 二、修复 * 切除（excision）： 外切酶去除切口之间的碱基； 合成（synthesis）： DNA聚合酶在缺口合成替代的DNA; 连接酶封闭切口。 2、切除修复（Excision repair） * 填补正常拷贝的缺口。 碱基受损导致结构变形； 复制产生一条正常双链分子和一条双链都受损的分子； 从正常双链的相应序列截取一段，填补在缺口处； 3、重组修复 / 复制后修复 Recombinational repair * 在缺乏切除修复系统的E. coli中，recA突变几乎可消除所有的修复功能。 重组修复通过单链交换模式进行，涉及recBC 。 * 三、糖基化酶 错配修复 糖基化酶和裂解酶可去除碱基 G-U错配的修复 糖基化酶 识别特异碱基，切割糖苷键 AP内切酶切割 * 糖基化酶和裂解酶可进一步破坏核糖 * 五、甲基指导的错配修复 在复制后的短暂时间里，GATC序列处于半甲基化的状态。这使修复错配的酶可以识别错配碱基对中错误的一个。 * 发现错配碱基对后，优先切除没有甲基化链的片段； MutS(核酸内切酶)结合于错配碱基对，然后加入MutL； MutS沿DNA移动，直到遇到GATC，MutS与GATC结合，形成loop结构； MutH（核酸内切酶）加入; * * MutH（核酸内切酶）加入，分别在GATC和错配碱基对的未甲基化链上切割，形成切口； 外切酶和解螺旋酶（UvrD）将切口之间的片段切除； DNA聚合酶III合成新的链，由连接酶封闭切口。 * 六、SOS反应 DNA损伤可以激活RecA，RecA则可使LexA发生自我切割，失去活性，进而激活多种修复系统。这一系列由RecA引起的修复反应称为SOS反应（SOS response）。 LexA：许多操纵子的阻遏物，22 kD；自身具有蛋白酶活性，可自我切割。 * SOS box * RecA 与LexA 相互抑制，各自形成正反馈。 * UmuD2UmuC复合体结合在RecA纤丝上；UmuD切割为UmuD′； UmuD切割为UmuD′，复合体UmuD′2C（DNA polymerase V）合成一段DNA取代损伤片段。 UmuD′2C 易错修复： * Home work 1.大肠杆菌经紫外光照射后会形成胸腺啥陡二聚体，可以修复这种损坏斑?比较这两种修复机制的异同。 2.简述大肠杆菌中重组修复的过程。在何种情况下修复来修复DNA中受损坏的区域?有哪两种修复机制细胞会通过重组. 1、盖茨的书不会告诉你他母亲是IBM 董事，是她给儿子促成了第一单大生意。 2、巴菲特的书只会告诉你他8岁就知道去参观纽交所，但不会告诉你他国会议员的父亲带他去的，是高盛的董事接待的。 3、王石的那些