生化分离技术与血液制品试卷.ppt

生化分离技术与血液制品 第一节 生化分离技术 1、生化分离技术的特点 1）、通常处理的发酵液或酶反应液中产品的浓度很低。溶液中欲提取物质的浓度越低，提取时所耗费的能量就越大，费用也就越高，产品的价格也越高。一般来说，生物物质的分离式十分困难的。 2）、生物产品很多是生化活性物质，易受坏境因素如温度、PH、金属离子和微生物等的影响，甚至失活，因而也增加了分离的难度。 3)、对最终产品的质量往往要求极高 2、生化产品的特点 1) 应用面广。 医药卫生、环保、动植物生长调节、食品和试剂等 2) 生化产品种类繁多，包括了大、中、小分子量的结构和性质复杂又各异的生物活性物质，生物活性各异。 3) 目的产物在初始物料中的含量低。 青霉素（4.2%）、庆大霉素（0.2%）、干扰素（50ug/ml）。 4) 产品价格与产物浓度呈反比 5) 初始物料成分复杂。除少量产物外，还有大量的细胞及碎片、其他代谢物（几百上千种）、培养基成分、无机盐等。? 6) 生物活性物质的稳定性低。易变质、易失活、易变性，对温度、pH值、重金属离子、有机溶剂、剪切力、表面张力等非常敏感。? 7) 产品的质量要求高，尤其是药品等。成品青霉素对其强致敏原?–青霉噻唑蛋白必须控制RIA值（放射免疫测定）小于100（1.5×10-6），蛋白类药物（杂质??2%）、重组胰岛素中杂蛋白小于0.01%。 盐析法 盐析法是指在药物溶液中加入大量的无机盐，使某些高分子物质的溶解度降低沉淀析出，而与其他成分分离的方法。 盐析法主要用于蛋白质的分离纯化。常作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。 蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。 同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，蛋白质分子之间聚集而沉淀。由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。 等电点沉淀法 等电点沉淀法是利用蛋白质在等电点时溶解度最低而各种蛋白质又具有不同等电点的特点进行分离的方法。 原理 酪蛋白等电点沉淀法快速鉴别奶粉和乳清粉 前言：奶粉和乳清粉在外观上很相近, 水溶液性状亦相似, 直接很难区分。 乳清粉不含酪蛋白, 只含乳清蛋白, 而常规的 全脂奶粉、脱脂奶粉以及其他调制奶粉等均含 有酪蛋白。实验中, 以酸调节待测样品水溶液 pH 值至4.6 附近，奶粉溶液有白色絮状凝块 从溶液中沉淀出来, 乳清粉溶液,则无此沉淀反 应, 利用这个现象立即就可以将奶粉和乳清粉 区别开来。 四、萃取分离 萃取：指液-液萃取，利用物质在两个互不相溶的液相之间分配特性不同类进行分离的过程。 一般流程：萃取剂和含有目标成分的料液混合接触 分离不相溶的两相并回收溶剂 萃余液脱除溶剂 萃取液：离开萃取器的萃取剂 萃余液：经萃取剂相接触后离开的料液 单级萃取 溶剂萃取技术 多级萃取 萃取技术 双水相萃取技术 超临界流体萃取 （一）溶剂萃取 溶剂萃取技术是利用目的物在两种互不相容的溶液中的溶解度不同，使其从一种溶液中转移到另一种溶液中，以达到浓缩和提纯的目的。 在溶液萃取中，被提取的溶液称为料液，其中所含的被提取的物质称为溶质，用来进行萃取的溶剂称为萃取剂。 萃取过程的分离效果主要表现为被分离物质的萃取率，萃取率为萃取剂中被萃取成分与原溶液中该成分的溶质的量之比。 萃取率越高表明萃取分离的效果越好。 萃取分离的影响因素主要有：萃取剂、分配系数、在萃取过程中两相之间的接触情况。在一定情况，被萃取物的分离效果主要取决于萃取剂的选择和萃取次数。 选择合适的溶剂是溶剂萃取分离的关键。 溶剂选择应遵循的原则： 1、与水溶液不相溶，对目标成分有高的分配系数，溶剂本身低粘度，与水有较大的密度差； 2、消毒过程中热稳定性好； 3、对生物活性成分、细胞无毒性，对人员无毒性、低成本，能大批量供应，不易