甜瓜白粉病抗病基因的SSR标记描述.doc

本科毕业论文 题 目 甜瓜白粉病抗病基因的SSR标记 学 院 农学院 专 业 园 艺 毕业届别 姓 名 指导教师 职 称 研究员 甘肃农业大学教务处制 二〇〇九 年 五 月 目 录 摘要 1 关键词 1 1 前言 1 2 材料与方法 1 2.1 材料 1 2.1.1 植物材料 1 2.1.2 病原材料 2 2.1.3 SSR引物及试剂 2 2.2 方法 2 2.2.1 DNA提取前期的植物材料准备 2 2.2.2基因组DNA的提取 2 2.2.3 SSR引物多态性筛选 3 2.2.4非变性聚丙烯胺凝胶电泳检测 3 2.2.5 抗病池和感病池的构建 5 3 结果与分析 5 3.1甜瓜基因组DNA 的提取 5 3.2 SSR引物在两亲本间的扩增 5 3.3 SSR引物在两池间的扩增 8 3.4 多态性SSR引物CSAT425的F2群体检测 9 4讨论 10 4.1 PCR体系各组分的影响 10 4.2 关于BSA法 10 参考文献: 11 英文摘要 12 致 谢 13 甜瓜白粉病抗病基因的SSR标记 （甘肃农业大学 农学院 兰州 730070） 摘要：本实验以抗白粉病品种PMR5和感白粉病品种黄河蜜与其杂交后代F2群体为材料。通过分离群体分组分析法（BSA），利用F2群体的极抗株和极感株的DNA建立抗、感池，进行抗病基因的SSR标记筛选。经过反复的筛选，引物CSAT425在亲本和F2代抗感基因池之间扩增出一条大小约为98bp的多态性片段。经F2代群体单株验证后，该多态性条带与PMR5抗白粉病基因连锁，其标记与抗白粉病基因的重组率为13%。定名为CSAT42598，可以作为甜瓜抗白粉病辅助选择的分子标记。 关键词：甜瓜；白粉病；抗病基因；SSR标记 1 前言 甜瓜（Cucumis melo）是世界十大水果之一，在世界园艺业中占有重要的地位。甜瓜在中国栽培历史悠久，中国甜瓜的面积和产量均居世界第一。西部地区甜瓜更是重要的经济作物。甜瓜白粉病是甜瓜重要的病害之一，常常造成甜瓜产量的损失和品质的降低。解决病害最有效、最安全的方法就是培育抗病品种。而利用分子标记辅助抗病品种的选育将能极大的提高选择效率和缩短育种进程。 分子标记是以生物体的遗传物质DNA的多态性为基础的遗传标记。目前，广泛应用的分子标记技术主要有RAPD[1]、AFLP[2]、ISSR[3]、SSR[4]等。SSR微卫星标记也称简单序列重复，其最大特点是等位位点丰富，因此SSR标记成为有价值的遗传标记。本试验以抗感病材料杂交的F2代为材料，采用分离群体分组分析法（BSA）SSR标记法进行甜瓜白粉病抗病基因的标记，为分子标记辅助选育抗病品种奠定基础。 2 材料与方法 2.1 材料 2.1.1 植物材料 甜瓜材料亲本为：甜瓜抗病品种PMR5、感病品种黄河蜜3号，以PMR5 为母本，黄河蜜3号为父本杂交得F1，F1自交得F2。2008年4月初将双亲、F1和F2群体材料播种，5月份进行苗期白粉病菌接种鉴定。苗期接种试验在甘肃农业大学农学院试验基地塑料大棚内进行。 2.1.2 病原材料 甜瓜白粉病菌采自皋兰SSR引物及试剂 本实验所用化学试剂均为市售200对SSR引物，由生物工程有限公司合成PCR扩增反应试剂10×PCR Buffer、Mg2+、 dNTP、Taq-70 ℃温度下保存。 用摩擦接种法接种白粉病病原菌。当感病对照品种黄河蜜感病普遍率达100%时，即可调查试验材料单株侵染型。本研究选用了中国农业科学院蔬菜花卉研究所植保室的病情分级标准，将发病程度分为6个级别：0级，无病症；1级，病斑面积占总叶面积的1/3，白粉模糊；2级，病斑面积占总叶面积的1/3-2/3，白粉明显；3级，病斑面积占总叶面积的2/3以上，白粉厚，连片；4级，白粉浓厚，叶变黄，坏死；5级，坏死叶面积占总叶面积的2/3以上。并且调查时每个单株自下而上、由重到轻调查5片叶子，根据侵染型级别及各级侵染型数目确定抗、感类型的划分标准。对F2抗、感病株进行统计。 抗病亲本PMR5，感病亲本黄河蜜3号，F１，F２等四个材