代谢工程—周奕腾改+试卷.docVIP

红色为11级真题试卷 两个应用实例： A、添加物导致代谢途径酶活加强：加维生素增强了磷酸果糖激酶活性和乳酸脱氢酶活性，增强了乳酸的生产 B、加入葡萄糖酸钙能促进高6一磷酸葡萄糖脱氢酶和葡萄糖激酶的酶活力，促进了肌苷的合成 4、酶调节方式、反馈调节方式： 操纵子：指启动基因、操纵基因和一系列紧密连锁的结构基因的总称。转录的功能单位。很多功能上相关的基因前后相连成串，由一个共同的控制区进行转录的控制，包括结构基因以及调节基因的整个DNA序列。主要见于原核生物的转录调控，如乳糖操纵子、阿拉伯糖操纵子、组氨酸操纵子、色氨酸操纵子等 分支代谢调节途径： A.同 功 酶 调 节：催化相同反应，但酶分子结构有差异； B.协同反馈抑制：一个不能少； C.累积反馈抑制：按比例累加，无协同效应，无拮抗作用； D.增效反馈抑制：1+12 (末端产物Y和Z单独过量时，各自对途径中第一个酶E1仅产生较小的抑制作用，一种末端产物过量并不影响其他末端产物的形成。只有当Y和Z同时过量，才能对E1产生较大的抑制作用。) E.顺序反馈抑制：按①→②→③顺序逐步抑制； F.联合激活或抑制调节：途径产物各自调节，同一中间产物； 会计算累积反馈抑制（试卷时60%，20%，68%） 如30%和40%：30%*（100%-40%）+40%=58% 不同谷氨酸生产菌的两大特征：α-酮戊二酸脱氢酶的缺乏;对生物素的需要(生物素缺陷型) 代谢流(物流/通量)(flux)指流入代谢物经该途径转变为流出物的速率。 代谢流分析(metabolic flux analysis)：又称代谢通量分析，一种计算流经各种途径的通量的技术，用于描述不同途径的相互作用和围绕支点的物流分布。 代谢设计原理：提高通向目标产物的代谢流；扩展代谢途径；构建新的代谢途径 代谢工程研究的基本程序：改良靶点的确定；基因操作；效果分析 基因操作：基因过量表达，基因敲除，异源基因导入 四大组学：基因组学与比较基因组学； 转录组学；蛋白质组学； 代谢组学 英文简称： LC：液相色谱；GC：气相色谱；GC-MS：气质联用仪；NMR：核磁共振；HPLC:高效液相色谱；CE：毛细管电泳；2-DE：双向凝胶电泳；DIMS：直接注射质谱；FT-IR：傅立叶转换红外色谱；IEF：等电聚焦；ESI—MS：电喷雾质谱；RI：示差折光检测法；UV：紫外检测法； 比较基因组学:在基因组图谱和序列分析的基础上，对已知基因和基因的结构进行比较，了解基因的功能、表达调控机制和物种进化过程的学科。 代谢工程的基本研究思路 其中设计策略是基础，遗传修饰是关键，代谢分析则决定是否需要进行新一轮的代谢工程循环。 代谢通量分析：代谢通量的概念、胞内通量的确定方法以及通过代谢通量的系统研究所得到的结论，统称为代谢通量分析 代谢通量计算（入为+，出为—） 18、AX(t)=0 如果方程数小于反应速率数目（代谢通量），方程有无数解或不确定解，称为不定系统。 如果方程数大于反应速率数目，称为超定系统。 19、载流途径：是代谢网络中的一部分途径首尾相衔接形成的一条从原料化合物到目的产物的途径。 20、设计育种以及发酵工艺控制的 的五字策略 ： “ 进、通、节、堵、出 ” ①进，促进细胞对碳源营养物质的吸收；②通，使来自上游和各个注入分支的碳架物质能畅通地流向目的产物；③节，阻塞与目的产物的形成无关或关系不大的代谢支流，使碳架物质相对集中地流向目的产物；④堵，消除或削弱目的产物进一步代谢的途径；⑤出，促进目的产物向胞外空间分泌。 21、节点：即代谢网络的分支点，是代谢网络中一个反应序列分叉成两条或更多条不同途径的一些点（代谢物）。 主节点：虽然一个代谢网络由大量的节点组成，一般相信在相当少的节点处的分配比实际上影响着终产物的得率，这些节点称为主节点。 节点的分配比：节点输出途径的代谢流的比值。 柔性节点：若流入每一分支的流量容易改变以满足需求，这样的节点称为柔性节点(flexible node)。 刚性节点：若一个节点的一个或多个分支的分配率被严密控制，则称该节点是强刚性的。 半柔性（弱刚性）节点：若在一个节点的流量分配，由它的一个分支的动力学占优势，则称该节点是半柔性（弱刚性）节点。 23、会判断（柔性节点，分配比可变，总量相同。刚性节点分配比不变，比例相同） 节点1柔性节点2刚性：削弱B1的代谢通量，1增大，P变大 削弱B2的代谢通量，P变小 节点1刚性节点2柔性：削弱B1的代谢通量，1减小，P变小 削弱B2的代谢通量,P增加 若节点1或节点2为刚性时，B1增大，P1增大，P2减小。分3种情况 增加的＞减少的，P增大 增加的＜减少