干细胞库,免疫细胞与干细胞的区别【参考】.docVIP

什么是干细胞库，干细胞实体库，干细胞资料库？ 干细胞库是在约为－196液氮中（深低温）储存干细胞或相关资料的场所。一个完善的干细胞库应具备随时随地将健康干细胞提供临床使用的能力。按所储存的干细胞来源和采集方式，干细胞库分为脐血干细胞库、骨髓和外周血干细胞库。 脐血干细胞库所做的工作是将新生儿的脐血采集后经过分离冷冻并储存起来。在每份脐血中，大约含数百万个干细胞，足够供一个幼儿或少年患者使用。如果是在成年后发病，一份脐血所提供的干细胞数量就不够用了，但是将来可以通过干细胞的扩增技术得到解决。 骨髓和外周血干细胞库可分为资料库和实物库。资料库所做的工作是将健康者提供的骨髓或外周血干细胞进行HLA配型和资料登记，待需要时再采集其骨髓。实物库则是在进行细胞配型和资料登记的同时，采集和储存健康提供者可供移植用的骨髓或外周血干细胞。 干细胞库按提供方式又分为公共库和自体库。公共库所储存的干细胞是他人的干细胞，以满足需要移植但自体干细胞没有被保存的病人的需求。自体库则是储存在自己出生或健康时采集的部分干细胞，以备自己生病时用。目前，自体脐血储存多由父母为子女来做。HLA抗原是人类主要组织相容性复合物抗原。它们与同种异体移植中的排斥反应有密切关系。HLA是由 HLA基因复合体所编码的产物，HLA复合体是人类中最复杂的基因复合体，其遗传主要特点是共显性复等位基因遗传，是调节人体免疫反应和异体移植排斥作用的一组基因，位于第六号染色体的短臂上。每个座位上的 HLA基因均可编码一种特异性抗原，主要表达在细胞膜上，或以游离状态存在于血液和体液中。 HLA抗原可根据不同基因位点的产物和它们的功能加以分类。目前研究较充分的有HLA-A，B，C，D，DR，DQ和DP七个位点。每个位点上均有很多等位基因，为共显性复等位基因。目前已确定HLA复合体共有1028种等位基因。其中，HLA-A、B、C座位上的基因编码的抗原成分称为 I类抗原。I类抗原是一种膜糖蛋白，存在于所有有核细胞的膜上，以淋巴细胞上的密度最大。 II类抗原是由 HLA-D、DR、DQ、DP座位基因所编码的抗原。它是由两条糖基化的跨膜多肽链构成，分别称为α链和β链，其抗原特异性主要与β链有关；主要表达在 B细胞、巨噬细胞和其他抗原递呈细胞上。 第一类抗原： HLA-A，HLA-B，HLA-C 第二类抗原： HLA-D，HLA-DR，HLA-DQ，HLA-DP 第三类抗原： C4A，C4B，C2，Bf等补体成分 通过遗传，人每套染色体有两条，一条来自父亲，一条来自母亲。每个位点含有两个等位基因，一个来自父亲，一个来自母亲。两个等位基因是相互独立的，既一个基因不能抑制另一个基因的表达。某一个体，如果一个位点的两个基因是不同的，称为杂合子基因；如同一位点具有同样的等位基因，称为纯合子基因。HLA位点具有众多的等位基因，造成HLA的极端多态性。HLA分型方法包括血清学分型、细胞学分型和基因分型。血清学和细胞学分型技术主要侧重于分析HLA抗原的特异性，基因分型方法则侧重于分析基因本身的多态性。细胞学分型技术由于分型标准细胞来源困难，且方法繁琐，不适于常规检测使用，正渐被淘汰。 （一）淋巴细胞分离淋巴细胞分离的方法很多，主要有直接沉淀法、密度梯度分离法、细胞分离器法和免疫磁珠法等。现国内大多数实验室多采用密度梯度法，而有条件的实验室已采用免疫磁珠法分离淋巴细胞。 免疫磁珠法分离T、B淋巴细胞FluoroBeads?是一种可荧光染色的免疫磁珠，由特异性的单克隆抗体和可磁化的金属颗粒结合而成。磁珠磁化后，受磁力的吸引可被分离。当磁力移开后，磁珠不会带有磁力但可被反复磁化。已和磁珠结合的特异性单克隆抗体和相应的淋巴细胞结合，既可分离淋巴细胞。 （二）微量淋巴细胞毒实验 这是一种补体依赖性淋巴细胞毒实验。该方法目前仅用一微升抗体、一微升细胞、一微升补体，孵育一小时。即抗原+抗体+补体结合。故称快速微量淋巴细胞毒实验方法。 淋巴细胞具有HLA抗原，在补体存在的情况下，HLA细胞毒抗体(IgG,IgM)能够结合到带有相应抗原的活淋巴细胞膜上，并在膜上打洞致淋巴细胞死亡。如淋巴细胞不带有相应的抗原，则无此作用。死细胞可用数种方法观察到，最简单的方法是染色法。染色液可通过死细胞膜进入细胞内，以便细胞着色。目前常用的染料为荧光液和曙红(CFDA和EB)。在荧光显微镜下，活细胞呈绿色(CFDA与细胞膜结合)，死细胞呈红色(EB可通过被破坏的细胞膜进入细胞与DNA结合)；在相差显微镜下，活细胞因不被着色而明亮，死细胞由于曙红进入细胞而色暗无光。估计死细胞占全部细胞的百分比，可以反映出抗原与抗体反应的强度。目前，国际通用的判断方法为NIH计分法。在T和B淋巴细胞上都存在HLA-A，B，C抗原，因此检测这些抗原一般可直接用