葡萄籽花青素治疗脊髓损伤的实验研究【参考】.docVIP

葡萄籽花青素治疗脊髓损伤的实验研究 实验设计目的意义 目的意义 实验利用葡萄籽花青素治疗脊髓损伤，探讨其对大鼠脊髓损伤恢复的作用机制，为临床上脊髓损伤的治疗提供新的方法，具有十分重要的意义。 国内外研究现状 脊髓损伤( Spinal Cord injury，SCI)所造成的外伤性截瘫是最严重的外伤之一。据统计，全世界范围内SCI的发病率大约20-40例/100万人/年[1]。随着现代交通工具的使用的增加, 临床上脊柱外伤合并SCI的病例有逐步增多的趋势。因此，SCI的病理生理的实验研究及治疗方法的探索受到了更广泛的关注。SCI可分为原发性损伤和继发性损伤。原发性损伤是由机械压迫、出血所致的神经细胞、轴突和血管的直接损伤，在短时间内形成且多为不可逆的。长期以来，国内外学者对脊髓继发性损伤的可能机制做了大量的探索，发现继发性脊髓损伤是多种神经生化机制及微血管机制相互级联、不断恶化的过程，如兴奋性氨基酸的释放、水肿、局部缺血、Ca2+聚集、脂质过氧化反应、炎症反应、能量代谢紊乱、乳酸堆积等，这直接导致细胞坏死和紧接着的细胞凋亡的发生。继发性损伤发生在相对较长时间内，且这种损伤是可逆的。继发性损伤加重和超过了原发性损伤的程度。到目前为止，对原发性脊髓损伤的治疗主要依靠外科手术，对继发性损伤的治疗包括药物治疗、高压氧治疗、电刺激治疗、基因治疗。临床常见的脊髓损伤多为产生于即刻的机械损伤和随之发生的继发性损伤，而脊柱损伤后的血管和神经生化机制是脊髓损伤的主要机制。如何防止继发性病理改变，是脊髓损伤早期治疗的研究方向。 原花青素是中草药及植物中广泛存在的一类多酚化合物的总称， 由不同数量的儿茶素或表儿茶素结合而成， 属于生物类黄酮。1961年从山楂新鲜果实的提取物中首次分离得到原花青素，后又相继在葡萄、山楂、花生、银杏等植物及中药金荞麦、地榆根、大黄中发现原花青素，其中以葡萄籽和松树皮中含量最高[1]。因葡萄籽中原花青素的含量极其高，故从发现起国外对其药理活性进行了许多体内、体外和离体细胞实验研究[2,3]，但国内这方面的研究起步较晚，最近的几年国内的学者对原花青素的研究越来越多。研究表明，葡萄籽原青花素（grape seed proanthocyanidin,GSP）是目前为止抗氧化能力最强的天然提取物，其在体内的抗氧化、清除自由基的能力是维生素E的50倍，维生素C的20倍[4]。国内外学者研究发现GSP可以对抗大鼠心肌缺血再灌注损伤[5,6]、动脉粥样硬化[7]、肾缺血再灌注损伤[8]、脑缺血再灌注损伤[9]这些都与GSP的抗氧化和清除自由基的能力有关。陈荣志[10]等发现GSP可通过抑制IkB的降解、NF-κB的活性和下调iNOS的表达来抑制大鼠脑缺血再灌注后的炎症反应。并且Li Wen-guan[11]等人研究发现，GSP可以抑制角叉菜胶诱发的大鼠足肿和巴豆油诱发的小鼠耳肿的炎症渗出液中一氧化氮合酶和氨基葡萄糖苷酶活性，降低I L-1B、肿瘤坏死因子和前列腺素E2 含量。另有研究报道[12]GSP显著减低大鼠脑组织中ICAM-1的表达，提示GSP提高脑组织的抗炎性从而对脑缺血再灌注损伤起到保护作用。Blazs 等[13]认为,GSPE能够抑制致炎细胞因子白细胞介素8和肿瘤坏死因子α的生成，这说明GSP通过不同途径发挥着抗炎的作用。周涌[14]等在研究PC12细胞氧化损伤时发现GSP可明显减轻H2O2的氧化损伤，表现为PC12细胞凋亡比率下降,，Caspase-3活性降低。王怡悦[15]等也发现GSP在深低温I-R过程中可能通过抑制Caspase-3 mRNA表达,进而抑制线粒体凋亡通路导致的细胞凋亡，从而发挥其抗凋亡脑保护作用。又有报道[16]GSP对H2O2诱导的海马神经细胞凋亡具有保护作用，GSP可增加Bcl-2表达同时减少Bax表达有关由此可以看出GSP可以抑制Caspase-3介导的细胞凋亡，并同时调控Bcl-2和Bax基因的表达。另外GSP还可促进细胞内外Ca2+的稳定，减少由Ca2+异常所造成的细胞损伤。 综上所述，推测GSP可以通过清除自由基，减少脂质的过氧化，减轻细胞的氧化程度和减轻水肿来直接保护细胞。也可以通过清除自由基抑制氧自由基的产生,而抑制NF-κB的激活,进而抑制iNOS的表达来减轻炎症反应对细胞的伤害。以及通过对一氧化氮合酶水平的调节进而有效清除自由基和保证三羧酸循环的能量供应和减少细胞的凋亡。GSP还可以通过调控Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达从而减少细胞的凋亡。GSP通过以上途径来减轻脊髓继发性损伤的程度，使脊髓损伤后的个体机能较快恢复。 存在的问题：目前葡萄籽花青素对脊髓损伤的研究还不太成熟，这方面的文献太少，这就为我们在实验药物用量等方面造成了一定的困难。 解决问题的思路：先用一定