基于中药血清化学及血清药理学方法_省略_护心肌细胞缺氧_复氧损伤物质基础_田友清.docxVIP

第 37 卷第 5 期Vol. 37，Issue 52012 年 3 月March，2012基于中药血清化学及血清药理学方法探讨香青兰 保护心肌细胞缺氧 / 复氧损伤物质基础田友清1，2 ，尚靖1* ，何婷1 ，蔡旻煊1 ，阿布卡德11. 中国药科大学 新药筛选中心，江苏 南京 210009;江苏联合职业技术学院 连云港中医药分院，江苏 连云港 222006)［摘要］目的: 利用中药血清化学及血清药理学方法探讨香青兰保护心肌细胞缺氧 / 复氧损伤的物质基础。方法: 测定和比较香青兰提取物及其灌胃给药前后大鼠空白血清和含药血清的 HPLC，寻找香青兰入血成分; 体外培养乳大鼠原代心肌细胞及 H9c2 细胞，用 Na2 S2 O4 或 N2 为缺氧剂建立缺氧 / 复氧损伤模型，以细胞活力、LDH 释放量、T-SOD 活力、MDA 产量及细 胞凋亡为指标，考察香青兰提取物及其含药血清、香青兰提取物不同给药剂量及不同给药时间段所采血清的处理物对细胞损 伤的影响。结果: 香青兰在血清中出现 4 个移行成分，其中 3 个为原型成分，1 个可能为代谢产物; 与模型组或空白血清组相 比，香青兰提取物、含药血清及不同因素影响下的血清处理物显著降低缺氧 / 复氧心肌细胞 LDH 释放量和 MDA 产量 ( P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01) ，显著升高 T-SOD 及细胞活力( P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01) ，明显抑制细胞凋亡。结论: 香青兰提取物 4 个入血成 分可能为香青兰保护心肌细胞缺氧 / 复氧损伤的物质基础。［关键词］香青兰; 血清药物化学; 血清药理学; 缺氧 / 复氧损伤; 原代心肌细胞; H9c2 细胞缺血性心脏病是当今世界致死率最高的疾病之一，利用各种手段进行血、氧再灌注是防治该病主要途径。然而临床中发现心肌缺血后再灌注往往导致诸多综合症，如心肌梗死、心肌收缩功能障碍、心律失常等，使缺血性心脏病的再灌注治疗成功率显著［1］，降低。因此 探索防治心肌再灌注损伤的潜在药物具有重要的临床意义。香青兰 Dracocephalummoldavica L. 为唇形科香青兰属植物，维吾尔医和民间用于治疗冠心病及血液质旺盛( 高血压) 历史悠久。初步药理和临床研究表明，香青兰具有保护心肌缺血、抑制血小板聚集、降血脂和清除氧自由基等，［2-3］作用 对冠心病心绞痛具有良好防治效果。但是，香青兰保护心肌缺血 / 再灌注损伤的作用及其机制和物质基础研究薄弱。本研究拟用中药血清化学［稿件编号］20110513012［基金项目］国家“重大新药创制”科技重大专项 ( 2009ZX09401-007) ; 中国药科大学中央高校基本科研业务费专项资金研究生项目( JKY2009025)［通信作者］* 尚靖，Tel: ( 025)E-mail: shangjing2006@yahoo. com. cn［作者简介］田友清，副教授，主要从事临床前药理研究，TelE-mail: tyq0505@ 163. com·620·和血清药理学的方法探索香青兰保护心肌细胞缺 氧 / 复氧损伤的物质基础，为将其开发成防治心肌缺 血 / 再灌注损伤的潜在药物奠定基础。材料1. 1 动物 SPF 级 SD 大鼠，体重 200 ～ 250 g，雄 性; SD 乳大鼠，1 ～ 3 d 龄，动物许可证号 SCXK( 苏)2007-0008，由南京青龙山实验动物中心提供。大鼠 于 SPF 级动物房饲养，定时给予全价营养饲料喂 食，室温 22 ～ 25 ℃ ，湿度 50% ～ 70% 。1. 2 药物与试剂 香青兰采于新疆维吾尔自治区， 经中国药科大学新药筛选中心尚靖教授鉴定为唇形科植物香青兰 D. moldavica 的干燥地上部分。甲醇 由德国 Merk 公司提供( 色谱纯) ; DMEM，胰酶，FBS由 GIBCO 公司提供; Hochest，PI 由碧云天生物技术 研究所提供; Na2 S2 O4 由国药集团化学试剂有限公司 提供; LDH，MDA，T-SOD 试剂盒由南京建成生物工 程研究所提供; 维生素 E( Vit E) 由南京泽朗医药科 技开发有限公司提供。1. 3 仪器 LC-2010C 四元泵高效液相色谱仪( 日 本岛津) ; SAVANT SPD 2010 真空浓缩机 ( Thermo Electron 公司 ) ; 倒置显微镜 ( Olympus ) ; 培养箱 ( Thermo) ; 缺氧培养箱 ( Thermo ) ; LEGEND Micro第 37 卷第 5 期Vol. 37，Issue 52012 年 3 月March，201221R 型离心机( 德国 Thermo scientific 公