培训课件--第六章 菌种复壮衰退及保藏.pptVIP

优点：低温、干燥、无氧、有保护剂，可保藏各大类微生物，保藏时间可达几十年，是目前使用最广、最有效的保藏方法。一般专业机构大都使用此法保藏。 缺点：不能保藏真菌菌丝。 （5）液氮保藏法 操作方法： 液氮温度可达－196℃。把菌悬液密封于安瓶中，置液氮罐内保藏。 优点：保藏效果好。 缺点：价格昂贵。 （6）基因工程菌保藏 携带外源基因的重组质粒通常是不稳定的，容易丢失。一般情况，细胞丢失了质粒，生长会加快。 基因工程菌的保藏是利用在抗性培养基中只有含重组质粒的细胞才能生长的原理 。 例如，外源DNA插入到质粒pBR322中，重组质粒转化入E. coli中，使其含有Ampr和Tetr，因此在培养基中加入Ampicillin（氨苄青霉素）和Tetacyclin（四环素），即可选出含有质粒pBR322的细胞。 由于微生物的多样性，不同的微生物往往对不同的保藏方法有不同的适应性，迄今为止尚没有一种方法能被证明对所有的微生物均适宜。因此，在具体选择保藏方法时必须对被保藏菌株的特性、保藏物的使用特点及现有条件等进行综合考虑。对于一些比较重要的微生物菌株，则要尽可能多的采用各种不同的手段进行保藏，以免因某种方法的失败而导致菌种的丧失。 三、菌种保藏机构（一）国内 1978年7月，中国微生物菌种保藏管理委员会（CCCCM）在北京成立。 下设六个全国性菌种保藏管理中心 1. 普通微生物菌种保藏管理中心 中科院微生物研究所：细菌、真菌 中科院武汉病毒研究所：病毒 2. 农业微生物菌种保藏管理中心 中国农科院 3. 工业微生物菌种保藏管理中心 轻工部食品发酵工业科学研究所 4. 医学微生物菌种保藏管理中心 卫生部药品生物检定所：细菌 中国医学科学院皮肤病研究所：真菌 中国医学科学院病毒研究所：病毒 5. 抗生素菌种保藏管理中心 国家医药总局四川抗生素研究所：新抗生素菌种 华北制药厂抗生素研究所：生产用抗生素菌种 6. 兽医微生物菌种保藏管理中心 农业部兽医药品监察所 （二）国外 1. 国际性机构 世界菌种保藏联合会（WFCC） 2. 美国 美国典型菌种收藏馆（ATCC） 农业研究服务处菌种收藏馆（ARS） 3. 荷兰 真菌中心保藏所（CBS） 4. 英国 国立典型菌种收藏馆（NCTC） 英联邦真菌研究所（CMI） 国立工业细菌收藏所（NCIB） 5. 日本 日本微生物菌种保藏联合会（JFCC） 东京大学应用微生物研究所（TAM） 大阪发酵研究所（IFO） 6. 西德 发酵工业研究所微生物收藏馆（MIC） 6.4 菌种的衰退、复壮和保藏 性状稳定的菌种是微生物学工作 最重要的基本要求， 否则生产或科研都无法正常进行。 一、菌种的衰退与复壮（一）衰退 1. 定义 衰退（degeneration）是指由于自发突变的结果，而是某物种原有一系列生物学性状发生量变或质变的现象。 菌种的衰退是发生 在微生物细胞群中的一个由量变到质变的逐步演化过程。 菌种原有的典型性状变得不典型时就称菌种退化，这种变异也称负变（minus mutation）。 影响微生物菌种稳定性的因素： a）变异； b）污染； c）死亡； 例如， 微生物菌落形态或个体形态的变化； 生长速度缓慢，产孢子量减少； 色素产生情况的变化； 研究菌种遗传标记的丢失， 生产菌种生产性状的劣化等。 2. 衰退的原因 造成菌种退化的主要原因是基因突变。 误区 生产工艺条件控制不当 杂菌污染 造成生产性能 下降 饰变 3. 衰退的防止 （1）选育生产性能稳定的菌株作为生产菌株 经诱变等处理后的菌种要连续传代、分离纯化，防止分离回复。 （2）控制传代次数 尽量避免不必要的移种和传代，并将必要的传代降低到最低限度，以减少自发突变的几率。 （3）创造良好的培养条件 创造一个适合原种的生长条件，就可在一定程度上防止菌种衰退 ； 例如，给予营养缺陷型适当的营养必需成分，可降低回复突变频率。 （4）利用不同类型的细胞进行接种传代 放线菌和霉菌一般用单核的孢子接种的，菌丝细胞常含有几个细胞核，甚至是由异核体组成的，用于接种就易出现离异（dissociation）或衰退。 例如，构巢曲霉如用分生孢子接种易退化； 如用子囊孢子接种则不易退化。 （5）采用有效的菌种保藏方法 菌种保藏的温度、所用的培养基等可影响自发突变。 （二）菌种的复壮（rejuvenation） 1. 定义 狭义的复壮： 是指菌种已发生衰退后，通过纯种分离和测定典型性状、生产性能等指标，从已衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性状的相应措施。 是一种消极的措施 广义的复壮： 在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性状的测定工作，以期