真空微波辅助提取—HPLC分析石蒜中生物碱-中山大学化学与化学工程.docVIP

真空微波辅助提取—HPLC分析石蒜中生物碱 霍茵 汪军霞 李攻科 （中山大学化学与化学工程学院,广东 广州５１０２７５） 摘要 本文建立了真空微波提取-HPLC联用技术分析石蒜中成分的分析方法。确定最优提取条件为：20 mL甲醇，样品颗粒度为60 ~ 80 mesh，提取时间10 min，提取温度75 ℃和初始真空度0.05 MPa。对于石蒜碱、力可拉敏和加兰他敏，VMAE/HPLC分析线性范围分别是10 ~ 400、10 ~ 500和10 ~ 200μg·mL-1，检出限分别是4.93、7.40和8.13μg·mL-1，回收率分别为57.4％、93.8％和100.3％，RSD分别为3.5％、5.2％和10.2％。用优化的实验条件比较了真空微波提取石蒜与普通微波提取和传统溶剂回流提取石蒜的提取率的差别。而从扫描电镜图看出，VMAE、MAE与传统热回流提取都没有使石蒜细胞破壁。 关键词 真空微波提取(VMAE)，高效液相色谱(HPLC)，石蒜 石蒜 (Lycoris)属于单子叶植物石蒜科，主要含生物碱、蜕皮甾酮、脂肪酸、淀粉等。据《本草纲目》等记载,石蒜具有解毒、祛痰、利尿、催吐等功效,主治痈疮恶核、咽喉肿痛、水肿等，现代人们对石蒜科的生物碱成分进行了广泛的药理活性研究,认为其具有中枢神经系统作用、心血管系统作用、抗癌抗肿瘤作用、抗菌、抗病毒作用等。传统石蒜中生物碱的提取方法浸提时间长，溶剂用量大。 利用微波辅助技术作样品前处理国内外已有不少文献报道[1－3]。微波辅助技术处理样品的最突出特点是反应速度极快,节时和节能,产率高,而且环境友好。其中微波辅助提取萃取(ＭＡＥ)作为一种有机成分提取的新技术,在环境、食品、制药等领域中得到了广泛的应用[4]。 由于微波提取加热迅速，使提取物瞬间达到很高的温度，致使一些热不稳定性物质会在高温下分解，所以微波提取不利于提取热敏性物质。真空微波提取技术是微波技术和真空技术有机的结合，它兼备了微波加热快、均匀及真空条件下低温提取的优点。真空微波提取与传统微波提取的主要差别是真空微波提取将萃取罐内的空气抽去，使罐保持无氧或少氧的状态，以避免提取液与空气中的氧发生氧化作用。另一方面，由于罐内的大气压较低，在较低温度就能达到溶剂的沸点，所以提取温度较传统微波提取低，避免了高温对有些热敏性物质的损坏。 本文建立应用VMAE对石蒜中的生物碱提取进行研究。对影响VMAE的条件样品颗粒度、提取温度、提取时间、初始真空度和相对水分含量进行了优化筛选,并与普通微波提取和传统溶剂回流提取进行了比较。并从SEM图，初步探索VMAE的机理。 1 材料与方法 1.1 材料和仪器 1.1.1 材料：广东石蒜（广东天普生物制药公司提供),经过组织捣碎机捣碎后,网筛分成不同粒径的颗粒物。 1.1.2 试剂：氢溴酸石蒜碱标准品，氢溴酸加兰他敏标准品（Sigma公司）；力可拉敏对照品（广东天普生物制药公司提供）；甲醇，盐酸，浓氨水，乙酸，三乙胺，三氯甲烷（广州化学试剂厂，分析纯）；怡宝纯净水（深圳怡宝公司）。 1.1.3 仪器：LC-10ATvp 高效液相色谱仪（SHIMADZU，Japan）配SPD-10Avp紫外检测器，___________________________ * 基金项目：国家自然科学基金,国家重点基础研究发展项目(G2000026302),中山大学化学与化学工程学院创新基金。 MARS-X微波提取仪（CEM，USA），XL-30环境扫描电子显微镜(Philips，荷兰），R201旋转蒸发仪（上海申科机械研究所）；pHS-3C型酸度计（上海雷度仪器有限公司），配雷磁牌E-201-C型pH复合电极（上海精密科学仪器有限公司），组织捣碎机（上海模型标本厂），AP-02B型真空泵（AutoScience，天津）。 1.1.4 真空微波提取装置：本实验采用改装MARS-X系统的内罐，在进行微波萃取前，用真空泵将罐内空气抽出，使罐内保持一定的真空度。 1.2 样品处理方法 1.2.1 真空微波提取：准确称取2 g石蒜样品放入萃取罐中，加入一定体积的提取溶剂，按照正交实验表中的真空度条件对萃取罐进行抽真空，然后进行微波提取。冷却后，取出萃取罐，将提取液过滤。 1.2.2 常压微波提取：准确称取2 g石蒜样品放入萃取罐中，加入一定体积的提取溶剂，在75 ℃下微波提取 10 min。冷却后，取出萃取罐，将提取液过滤。 1.2.3 乙醇加热回流提取：准确称取2 g石蒜样品，放入圆底烧瓶中，加入一定体积的提取溶剂，75 ℃水浴加热回流30 min，将提取液过滤。 1.2.4 净化提取过程：将过滤后母液旋转蒸干，用15 mL 2％(体积比)的盐酸溶解，转移到分液漏斗中，用氯仿提取（10 mL）3