蛋白质飞行质谱技术在肝癌早期诊断中的应用_韦霄.doc

702 Guangxi Medical Journal , May .2006 , Vol .28 , No .5 综述与讲座 白质飞行质谱技术在肝癌早期诊断中的应用 △ 广西医科大学公共卫生学院 (南宁 530021) 韦 霄 综述 何 敏＊ 张志勇 审校  原发性肝癌(hepatocellular carcinoma , HCC)是最常见的恶性肿瘤之一, 严重的威胁着人们的健康。 全世界每年大约有 50 万人患肝癌, 而我国占全世界肝癌发病的一半以上〔1〕 , 其中每年约 11 万人死亡, 占全世界肝癌死亡人数的 45 %〔2〕 。 据卫生部统计, 20 世纪原发性肝癌已上升为我国第二位癌症杀手, 在城市和农村都仅次于肺癌〔3〕 。 由于目前对肝癌的病因还不是很清楚, 且尚无有效的治疗手段, 所以对肝癌的二级预防就显得尤为重要。 目前肝癌的诊断技术 目前肝癌的主要诊断依据是血清学和影像学。 甲胎蛋白 (Alphafetoprotein, AFP)是临床上常用的血清学指标, 但近 1 3 的肝癌患者 AFP 阴性, 且其特异性较差〔4, 5〕 。 超声也是肝癌诊断的重要手段, 但超声只能发现 1 cm 以上的病灶, 对弥漫型和转移性小结节型肝癌容易漏诊〔6〕 。 因此, 临床工作者试图寻找其它肿瘤标志物来帮助诊断, 如配合谷氨酰转肽酶(γ- GT)、α- L-岩藻糖苷酶(AFU)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和 DR-70TM 等检测, 虽灵敏度大大提高, 但特异度仍较差〔7〕 。 肝癌早期没有明显体征, 绝大多数病人在晚期才被发现。 因此,探索和建立一种简单、快速、灵敏度高和特异性强的早期诊断技术已成为临床上的迫切需要。 蛋白质飞行质谱技术 蛋白质飞行质谱技术又称表面增强激光解析及电离飞行时间质谱(Surface Enhanced Laser Desorption Ionization Time of Flight-Mass Spectrom, SELDI-TOF-MS)技术, 该技术整合了芯片 和质谱技术, 将蛋白样品的制备、生化反应和检测分析等过程集成在芯片上进行。 它的出现促进了肿瘤蛋白质组学的研究, 在寻找新的肿瘤标记物用于早期诊断、筛查和监测治疗效果方面展示了自身特色。 其原理是样品经过简单的预处理后直接地加到表面经过特殊修饰的芯片上, 不同芯片可以选择性地捕获阳离子蛋白、疏水性蛋白和金属结合蛋白等, 结合能量吸收分子(Energy Absorbing Molecules, EAMs)后的蛋白质在真空管中经激光轰击吸收能量后电离, 带有电荷的蛋白质在加速电场的作用下, 脱离芯片表面向阴极飞去, 荷质比(Mass Charge ,M Z)大的飞行时间长, M Z 小的飞行时间短, 以此标记蛋白质的分子量, 绘出蛋白质图谱, 再经专用蛋白图谱统计软件分析, 可直接显示样品中各种蛋白质的含量、大小等信息。 SELDI 蛋白芯片技术具有直接用粗样本(可直接检测不经处理的尿液、血液、脑脊液、关节腔滑液、支气管洗出液、细胞裂解液和各种分泌物等)、不需任何标记或加尾、所需样品体积  少(0.5～ 400 μL)、简便易行、分析速度快(整个测定过程一般可以在 5 min 内全部完成)、高通量、灵敏度高(检测范围为 1 ～ 50 fmole 蛋白质)、特异度高、重复性好、检测分子量范围广 (500 Da ～ 500 kDa)和所得蛋白质信息多等特点〔8 ～ 10〕 。 在寻找卵巢癌、前列腺癌、肺癌、乳腺癌、大肠癌等疾病的诊断标志物方面已经取得了较大进展〔11 ～ 15〕 。 蛋白质飞行质谱技术在肝癌早期诊断中的应用研究 Poon 等运用蛋白质飞行质谱技术 , 从肝癌患者血清中筛选出差异蛋白, 并建立了相应肝癌蛋白质指纹图谱。 然后应用这一图谱预测未知血清样品, 包括肝癌患者、肝良性病变患者(肝硬化和肝炎)和正常人, 达到较高的灵敏度和特异度〔16～ 19〕 , 为肝癌的早期诊断提供了一条新的途径。 同时还发现, 不同亚型肝癌细胞与正常肝细胞蛋白质谱比较存在共同的差异蛋白, 而不同亚型肝癌细胞之间的蛋白质谱表达也有差别〔2 ,20〕 , 这为了解肝癌的发生机理提供了新线索。 比较各学者在使用检测样品种类、芯片类型、样品的处理和数据分析系统等方面的差异, 总结如下。 3.1 检测样品种类 对肝癌研究目前所使用的检测样品只有血清和细胞裂解液。 由于血清中蛋白部分来源于组织细胞的分泌和代谢, 组织细胞发生病理改变时, 其细胞内改变的成分包括肽类、蛋白质、酶类和代谢产物等可分泌到血液中, 比如肝癌可在血清中检测甲胎蛋白, 卵巢癌可在血清中检测 CA125 抗原, 前列腺癌可在