离体蛙类心脏灌注及药物的影响学案.pptVIP

1 * * 第五次实验 离体蛙类心脏灌注及药物的影响 刘古锋 蒋杨 实验原理 注意事项 实验后处理 实验步骤 实验目的 主要内容 心脏的生理学特性： 兴奋性(excitability) 自律性(autorhythmicity) 传导性(conductivity) 收缩性(contractility) 正常的 结构功能 适当负荷 适宜的 内环境 正常的 神经支配 （在体） [Na+] [K+] [Ca2+] [H+] NA、Ach、阿托品、毒K、温度 离体蛙心的生理特性： 静脉窦的存在，仍可节律性收缩 所需环境条件简单，存活时间长 制备离体蛙心 取蛙，破坏脑和脊髓 剪开胸腔和心包膜，辨认蛙心结构 结扎右主动脉，结扎静脉（避开静脉窦） 左主动脉处结扎、切口、插管、固定、 剪断，蛙心离体 实验步骤： 连接实验装置 实验装置参数设置 给予处理因素 离子影响：0.65%NaCl；2%CaCl2；1%KCl 递质影响：1:10000NA；1:100000Ach； 1:2000阿托品+1:100000Ach 药物影响：0.025%毒毛旋花子甙K 温度影响：4℃林格液 酸碱影响：2.5%NaHCO3； 3%乳酸+2.5%NaHCO3 记录正常收缩曲线 幅 度：心脏收缩的强弱 疏密度：心搏频率 规律性：心搏的节律性 基 线：心室舒张的程度 记录 制备离体蛙心标本不要伤及静脉窦；插管 插入左心室后要及时将血液吸出，以防堵塞。 2. 保持蛙心的活性，注意滴加林格液。 3. 每次换液时蛙心内的液面应保持大致相 同的高度(负荷相同)。 4. 吸管要分开使用。 注意事项： 5. 加药时先加1滴，出现效应后应及时更换 为林格液。 6. 每次施加处理因素前应先记录一端正常曲 线，做好标记，要有恢复曲线。 7. 注意保护换能器，不要过度牵拉，液体不 要滴在上面。 1. 截取各种处理因素具有代表性的蛙心收缩 曲线，制成单页图打印出来。 2. 分析各处理因素对蛙心收缩曲线影响及其 原理，写出实验报告。 实验结果处理 0.65%NaCl渗透压与林格液相同但缺K+,Ca2+ Ca2+减少，收缩力减弱 K+减少，膜对K+通透性降低，静息电位绝 对值减少 K+外流减少，Na+内流增加，4期If增强 1.等量 0.65%NaCl, 收缩力减弱，心率加快 胞外Ca2+浓度升高，内流增多，心肌收缩力增加，幅度增大；但胞内Ca2+过多，肌钙蛋白与Ca2+结合不能解离发生，导致心肌舒张不完全，严重者可发生钙僵，图中表现为收缩曲线上移。 Ca2+浓度升高，抑制Na+内流 2. 2% CaCl2 收缩力增加，心率减慢 胞外K+浓度升高，Ca2+内流减少（竞争） 胞外K+浓度升高，静息电位绝对值减少，低于-55~-60mV时，快Na＋通透失活，兴奋性下降，心率减慢，甚至停止在舒张期 3. 1% KCl， 收缩力减弱，心率减慢 NA与心肌β受体结合后，激活AC,Ca2+通道开放增加，正性变力、变时、变传导 4.NA 收缩力增加，心率加快 Ach与心肌细胞膜上M-R结合，抑制AC，抑制钙通道，同时激活GK蛋白， K+外流增加，负性变力、变时、变传导 5.Ach 收缩力减弱，心率减慢 阿托品为M胆碱受体拮抗剂，但离体蛙心无神经支配，无ACh释放，加入阿托品后无明显作用； 再加入Ach，由于阿托品已将M胆碱受体阻断，故Ach无作用。 6.阿托品+Ach， 无明显变化 抑制Na+-K+－ATP酶使细胞内Na+量升高，K+下降，胞内Na+升高，可促进细胞内外Na+-Ca2+交换,使细胞内Ca2+增多，从而加强心肌细胞收缩力。 （毒K的作用有赖于胞外 Ca2+的存在） 7.毒K 收缩力增加 温度过低时，肌凝蛋白头部ATP酶活性降低酶活性降低，代谢水平降低，各离子通道蛋白活性降低，心脏收缩活动减弱，心率减慢。 8. 4℃冷林格液 收缩力减弱，心率减慢 NaHCO3可使细胞内H+外逸，与胞外K+进行H+-K+交换，K+外流减少，细胞的膜电位减小甚至兴奋性完全丧失。另外， NaHCO3也使林格液中游离的Ca2+浓度降低（如形成CaCO3沉淀），内流Ca2+减少，心肌收缩力降低。 9. 2.5%NaHCO3 收缩力减弱 H+可