第4章优良菌种选育.pptVIP

§4 菌种选育 尽管生产菌种最初均是来自于自然界,但天然菌种的生产性能一般比较低下。优良菌种的选育为生产提供了各种类型的突变株，大幅度提高了菌种产生有利用价值代谢产物的水平，还可以改进产品质量，去除不需要的代谢产物或产生新的代谢产物。 特别是基因工程、细胞工程和蛋白质工程等较为定向技术的发展，使菌种选育技术不断更新，而产生出众多有价值的微生物工程产品。主要的育种技术包括： 自然选育 诱变选育 抗噬菌体菌种的选育 杂交育种 原生质体融合技术 基因工程技术等 这些技术都为生产提供了优良生产性能的菌种，本章将对此作一些简要的介绍。 选育优良菌种常用的方法：  自然选育、诱变选育、抗噬菌体菌种的选育、杂交育种、原生质体融合技术、基因工程技术。 优良菌种的衡量标准: 一般来说，优良的生产菌种应该具备如下的基本特性：① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ ⑨（见教材P33）。 4.1自然选育 自然选育:不经人工处理，利用微生物的自然突变进行菌种选育的过程称为自然选育。 一般认为自然突变有两种原因引起，即多 因素低剂量的诱变效应和互变异构效应。 多因素低剂量的诱变效应:是指在自然环境中存在着低剂量的宇宙射线，各种短波辐射，低剂量的诱变物质，和微生物自身代谢产生的诱变物质等的作用引起的突变。 互变异构效应:是指四种碱基第六位上的酮基或氨基的瞬间变构，会引起碱基的错配。这种互变异构现象是无法预测的；对这种偶然事件作了大量的统计分析后，仍能找出规律来。据统计，这种碱基对错误配对引起自然突变的机率为10-8～10-9 。 胺式亚胺式互变异构 酮式烯醇式互变异构 自然选育的一般程序是将菌种制成菌悬液，用稀释法在固体平板上分离单菌落，再分别测定单菌落的生产能力，从中选出高水平菌种。 ※自然突变可能会产生两种截然不同的结果,一种是菌种退化而导致目标产物产量或质量下降;另一种是对生产有益的突。 自然选育是一种简单易性的选育方法，可以达到纯化菌种、防止菌种退化、稳定生产、提高产量的目的。 但是自然选育的效率低，因此经常与诱变选育交替使用，以提高效率。 4.2 诱变选育 微生物其自身代谢过程是被严格调控的，所有的代谢产物都不会过量积累，并且还存在着代谢产物的分解途径。 因此从自然环境中分离的菌种的生产能力有限，一般不能满足生产的实际需要。 诱变育种是提高菌种生产能力，使所需要的某一特定的代谢产物过量积累的有效方法之一。 4.2.1 诱变育种的原理 诱变育种的理论基础是基因突变，突变主要包括染色体畸变和基因突变两大类。 诱变育种:就是利用各种物理化学诱变剂处理微生物细胞，提高基因突变频率，再通过适当的筛选方法获得所需要的高产优质菌种。 常用的诱变剂包括物理、化学和生物的三大类，见P35 表4-1。 4.2.2 诱变育种的基本方法 诱变育种一般包括诱变和筛选两个部分。 诱变部分成功的关键包括: (1) 出发菌株的选择 (2) 诱变剂种类和剂量的选择 (3) 合理的使用方法 4.2.2.1 出发菌种的选择 用来进行诱变的出发菌种的性能对提高诱变效果和效率十分重要。应注意下列方面： （1）选择出发菌种应注意诱变出发菌种要有一定的目标产物的生产能力。 （2）其他生产性能如生长繁殖快、营养要求低、产孢子多且早、对诱变剂敏感。 （3）用作诱变的出发菌种还必须了解它的产量、形态、生理等方面的情况。 （4）可选择已经过诱变处理的菌种，因为这样的菌种对诱变剂的敏感性会有所提高。 4.2.2.2 诱变剂的使用方法 在微生物诱变育种中，诱变的方法有单一诱变剂处理和复合诱变剂处理。 复合诱变剂处理：是指用两种以上的诱变方法处理菌种。 对野生菌株单一诱变剂处理有时也能取得好的效果。但对经过多次诱变处理的老菌种，单一诱变因素重复处理，效果甚微。可以采用复合诱变剂处理来提高诱变效果。 复合诱变处理包括同一诱变剂多次处理，两种以上诱变剂先后分别处理和两种以上诱变剂同时或多次处理。 4.2.2.3 诱变剂的剂量选择 对不同的微生物使用的剂量不同，诱变剂的剂量与致死率有关，而致死率又与诱变率有一定的关系。因此可用致死率作为诱变剂剂量选择的依据。 一般来说，诱变率随诱变剂剂量的增加而提高，但达到一定程度以后，再提高剂量反使诱变率下降。因此近年来已将处理剂量从过去的致死率99～